外源化学物致癌作用课件.ppt

*08_外源化学物致癌作用*致癌物筛选试验主要包括：?基因突变试验：包括用微生物、昆虫、哺乳类动物细胞及啮齿类动物进行体外或体内试验，其中以Ames最常用。?染色体畸变分析，微核试验。?直接观察化学物对DNA的损伤：SCE试验。*08_外源化学物致癌作用*目前主张采用几种方法组合试验，减少出现假阴性和假阳性的情况。有人主张用Ames、小鼠细胞基因突变试验、SCE、体外细胞转化试验为一组，若这四种中有一种为阳性，则表明该物质致癌作用值得进一步探讨。*08_外源化学物致癌作用*（二）细胞恶性转化试验细胞恶性转化试验：是指受试物与正常细胞在体外接触，如有致癌作用，可使正常细胞形态、功能发生变化，发生与癌细胞相似的过程。体外培养细胞观察内容：细胞生长自控能力、增殖速度、细胞形态、生化表型以及移植于动物体内形成肿瘤的能力等。*08_外源化学物致癌作用*原理：癌细胞与正常细胞的不同是其核型的改变和因此而导致的生长自控能力的丧失。细胞自控能力丧失可能导致细胞在离体培养时生长特性改变。正常细胞：在液体培养时，克隆中的细胞排列有序、只能生长成单层；癌细胞：贴壁生长的克隆失去接触抑制的能力，因而形成的“恶性转化”克隆中的细胞排列杂乱，重叠生长。判断是否出现了细胞的恶变，须将转化的细胞植入试验动物体内，观察转化的细胞是否可发展成肿瘤。*08_外源化学物致癌作用*恶变的细胞表现细胞偏大，且大小不等；核大而畸形，染色质深染而粗糙，核浆比例倒置，核膜粗厚，核仁增生而肥大；核仁核胞浆因RNA增多而偏酸性，呈嗜碱性染色而偏蓝；多见核分裂现象；正常的接触抑制消失，它的克隆是多层细胞且排列紊乱；生长表型改变。*08_外源化学物致癌作用*常用的细胞种类细胞选择的主要原则：1、体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低；2、细胞自发突变率低，或自发转化能力很弱；3、已获得无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致肿瘤性。*08_外源化学物致癌作用*原代细胞：如SHE细胞、人类成纤维细胞、小鼠皮肤或大鼠支气管上皮细胞等；细胞系：BALB/C-3T3，C3H10T1/2，BHK-21；病毒感染细胞：如RLV/RE细胞（劳舍尔白血病病毒感染的Fisher大鼠胚胎细胞）和SA7/SHE细胞（猿猴腺病毒感染的SHE细胞）。*08_外源化学物致癌作用*优点：试验周期短，经济方便；一个细胞克隆或细胞巢就相当于一只受试物；受试物直接与靶细胞作用，便于控制剂量，不受吸收、代谢、分布的影响，并且可不受体内免疫系统等干扰；便于观察。缺点：仍存在假阳性、假阴性等问题。*08_外源化学物致癌作用*（一）哺乳动物短期致癌试验?小鼠肺肿瘤诱发试验?大鼠肝转变灶诱发试验?小鼠皮肤肿瘤诱发试验?雌性大鼠乳腺癌诱发试验二、动物致癌试验*08_外源化学物致癌作用*上述任一试验的阳性结果，其意义与长期动物致癌试验相当；但因试验期短、靶器官局限、适用化学物质类型较少，阴性结果意义不大。*08_外源化学物致癌作用*DNA损伤修复存在不均一性和可诱导性不均一性表现在不同个体、不同器官和不同种类细胞之间的修复能力不同，也表现为同一细胞内不同基因片段上的损伤获得的修复机会不同等，即表达基因优先于静止基因，调控基因优先于功能基因。可诱导性是指细胞修复DNA的能力并不是固定不变的，可被相关因素所诱导。在小剂量损伤因素的连续刺激下，DNA损伤修复的能力会升高。*08_外源化学物致癌作用*（三）癌基因、原癌基因及抑癌基因DNA上原（前）癌基因、抑癌基因很可能是化学致癌物的靶分子。*08_外源化学物致癌作用*?癌基因（oncogene）：一类在自然或实验条件下能引起细胞恶性转化及癌变的基因。?多数癌基因表达产物都是细胞信号转导系统的组成成分，作为细胞生长因子和细胞生长因子受体、核转录因子或转录调节蛋白，促进细胞有丝分裂，参与细胞周期的调控等。*08_外源化学物致癌作用*?癌基因是化学致癌物作用的靶分子?在细胞癌变过程中发挥关健作用?指导合成的蛋白质能促成细胞恶性表型的形成*08_外源化学物致癌作用*原癌基因（proto-oncogene）：指机体内正常细胞所具有的能致癌的遗传信息，即癌基因的原型.?在正常情况下，原癌基因呈静止状态，对细胞无害且具有重要生物学功能，如生长因子、受体、信号分子、转录因子和细胞周期调节等，癌基因是化学致癌物作用的靶分子。*08_外源化学物致癌作用*癌基