α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性试剂盒样本的处理方法:.docx

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α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性试剂盒样本的处理方法:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

将匀浆600g,4℃离心5min。

弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。

在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体α-KGDH活性测定。

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