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CD59-linker-CD2融合基因真核表达系统的构建
钟丹丹;高美华;李伟伟;张蓓
【摘要】目的CD59和CD2都是重要的淋巴细胞膜表面分子,参与T细胞信号转
导.文中构建CD59和CD2融合基因真核表达系统,探讨CD59向T细胞传递信号
的机制及CD59与CD2的相互作用.方法在CD59基因和CD2基因间加入一段
柔性链接头(linker)基因序列,构建CD59-linker-CD2融合基因真核表达系统.利用
RT-PCR法从人T细胞白血病细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增CD59和CD2基
因,分别构建CD59-T和CD2-T重组克隆载体,经限制性核酸内切酶酶切后与
pIRES质粒进行重组,构建pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达系统.结果
测序证实CD59和CD2基因扩增成功;经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴
定表明携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒构建成功.结论构建CD59-
linker-CD2真核表达系统为在真核细胞中表达CD59与CD2并进一步探讨其在T
细胞信号转导中的作用提供了实验材料.%ObjectiveBothCD59andCD2are
importantmoleculesonthesurfaceoflymphocytesandinvolvedinTcell
signaltranscluction.Thepurposeofthisstudywastoconstructa
eukaryoticexpressionvectoroftheCD59andCD2fusiongenetofacilitate
theinvestigationofthemechanismofsignaltransductionfromCD59toT
cellsandtheinteractionbetweenCD59andCD2.MethodsWe
constructedaeukaryoticexpressionvectoroftheCD59-linker-CD2fusion
genebylinkingtheCD59andCD2geneswithaflexiblechain(linker).The
CD59andCD2geneswereclonedbyRT-PCRfromthetotalRNAofJurkat
TcellstoestablishCD59-TandCD2Tcloningvectors,respectively,whichin
turnwereclonedintotheplasmidpIRESfollowingrestriction
endonucleasedigestiontoconstructaeukaryoticvectorcontainingthe
CD59-linker-CD2fusiongene.ResultsDNAsequencingconfirmedthe
successfulamplificationoftheCD59andCD2genes.Restriction
endonucleasedigestion,PCRandDNAsequencinganalysisprovedthat
theeukaryoticexpressionvectorcontainingtheCD59-linker-CD2fusion
genewasconstructedcorrectly.ConclusionThesuccessfulconstruction
oftheeukaryoticexpressionvectorcontainingtheCD59-linker-CD2fusion
genehaspreparedtheexperimentalgroundforfurtherstudyofthe
expressionsofCD59andCD2ineuk
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