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不同灭菌方法对灵芝成分的影响

摘要：目的：建立灵芝质量可靠且经济的灭菌方法。方法：采用热压灭菌、微波灭菌、紫外

线灭菌、干热灭菌和环氧乙烷气体灭菌方法对同一批灵芝灭菌，采用高效液相色谱法测定不

同灭菌方法对灵芝中灵芝多糖含量的影响。结果：环氧乙烷灭菌法可作为灵芝可靠且经济的

灭菌方法。

引言

灵芝为灵芝科(Ganodermatacea

e)真菌赤Ganodermalucidum(W.Curt.Fr.)Karst的干燥子实体。灵芝一般生长在湿度高且光

线昏暗的山林中，主要生长在腐树或是其树木的根部。灵芝是一种坚硬、多孢子和微带苦

涩的菌类植物，当达到成熟期的灵芝就会喷出粉状的孢子，从而进行繁殖。

灵芝的药理成分非常丰富，其中有效成分可分为十大类，包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜

类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物

碱、有机酸（主含延胡索酸），以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等。灵芝对人体具

有双向调节作用，研究表明灵芝具有滋养强壮、调节免疫、抗衰老等多种药理作用，所治病

种，涉及心脑血管、消化、神经、内分泌、呼吸、运动等各个系统，尤其对肿瘤、肝脏病变、

失眠以及衰老的防治作用十分显著。现代药理和临床试验证明，灵芝对多种疾病具有十分显

著的疗效。其中灵芝多糖被认为是灵芝扶正固本的主要有效成分之一。由于灵芝打成药粉

入药时，需要在入药前对灵芝粉进行灭菌并进行微生物限度检查，为考察灭菌方法对灵芝成

分的影响，故采用灵芝多糖作为指标成分，本文采用热压灭菌、微波灭菌、紫外线灭菌、干

热灭菌和环氧乙烷气体灭菌方法对同一批灵芝进行灭菌，采用高效液相色谱法测定了不同灭

菌方法对灵芝中灵芝多糖含量的影响，实验结果如下。

1、实验部分

1.1仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），VWD紫外检测器，Agilent化学工作

站。KQ-600B超声波清洗仪，热压灭菌锅，紫外灯。D-无水葡萄糖对照品由中国药品生物

制品检定所提供，批号为110833－20050，硫酸、无水乙醇为分析纯，环氧乙烷。灵芝为我

校食用菌实验室自己培育。

1.2灭菌方法原理

热压灭菌法(autoclavesterilization)利用饱和蒸汽的湿热在一定压力下所释放的潜热杀灭病

原微生物、细菌繁殖体、芽胞和病毒的方法。特点：温度高、穿透力强，效果可靠热力消毒

灭菌法。

微波灭菌法使菌体蛋白受热变性，破坏核酸及酶的活性，特点：穿透力强，简单方便。

紫外线灭菌法利用紫外线，使菌体蛋白质光解变性而死亡。常用紫外线灯管消毒法，最佳

杀菌波长：253.7nm；有效距离：物品：25～60cm,空气：小于2m；照射时间：灯亮5～

7min后开始计算应大于30min；适用：室内空气、物体表面；特点：简单、方便、无损

物品。

干热消毒灭菌法：是利用热力破坏微生物的蛋白质、核酸、酶、细胞壁和细胞膜等，从

而达到灭菌的目的。

环氧乙烷气体消毒使菌体蛋白凝固变性，干扰细胞酶的活性，改变细胞膜通透性，适用于

不宜使用高温消毒、耐湿的物品，特点：穿透力强，毒性大、易燃易爆不宜使用高温消毒、

耐湿的物品。

1.3灵芝粉的制备

取灵芝80~100℃干燥后，于-10~-15℃冰箱冷冻后立即粉碎成80~100目细粉。

1.4不同灭菌方法灵芝粉样品的制备

取灵芝粉，分装在牛皮纸袋中，分别采用热压灭菌、微波灭菌、紫外线灭菌、干热灭菌和

环氧乙烷气体灭菌。

1.5样品不同灭菌方法的微生物限度检查结果(见表1)

将原粉定为样品1，热压2、微波3、紫外4、干热5和环氧乙烷6，微生物限度检查方法

为平皿法。

表1结果表明，灵芝环氧乙烷灭菌方法灭菌效果较好。

1.6不同灭菌方法灵芝的含量测定

1.6.1色谱分析原理

用十八烷基键合硅胶为填充剂；XDB-C18柱(4.6mm×200mm,5μm)；硫酸-水（(6：1000)

为流动相；检测波长为200nm，流速0.6ｍl/min，进样量20μl，柱温30℃；理论板数按D-

无水葡萄糖峰计算应不低于3000。

1.6.2对照品溶液的制备

精密称取减压干燥48小时的D-无水葡萄糖对照品适量，加流动相制成每1ml含2mg的溶

液，滤过，即得。

1.6.3供试品溶液的制备分别取各种灵芝粉末1.0g，精密称定，置10ml的离心管中，加正

已