高考生物学二轮总复习课后习题 大题分析与表达练 6.基因工程类大题突破 (3).docVIP

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6基因工程类大题突破

1.(广东汕头三模)人表皮生长因子(hEGF)能够促进表皮细胞生长,对皮肤相关疾病及刺激性食物导致的胃肠溃疡具有修复治疗价值。已知细胞穿膜肽Pep-1能够携带大分子物质进入细胞内部,为解决hEGF穿透表皮能力弱的问题,科学家将Pep-1基因和hEGF基因进行连接,获得融合蛋白(epEGF)基因(图1),并将其与质粒A(图2)进行重组后导入大肠杆菌,制备由84个氨基酸组成的重组融合人表皮生长因子蛋白。

图1

图2

图3

图4

(1)研究者进行PCR扩增前根据epEGF基因设计了一对引物,据图1分析,该对引物序列的设计要求是???和。?

实验中常用电泳技术鉴定目的基因,图3电泳结果中样品(填“1”或“2”)对应的条带为epEGF基因的鉴定结果。?

(2)转化大肠杆菌后进行筛选时,可将其接种在培养基①上培养(图4),再利用灭菌的绒布在培养基①上印模,沾上菌落后转印至培养基②上培养。根据培养结果可知,号菌落是成功转化的大肠杆菌,可挑出进一步接种到培养液中克隆化培养,培养过程中需在适宜转速的摇床中进行,原因是。?

2.(广东联考)塑料制品方便人们生活的同时,也造成了短时期难以降解的“白色污染”。研究人员欲比较大肠杆菌YT1和芽孢杆菌YP1两类细菌降解塑料[主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)和聚丙烯(PP)等,两类细菌主要降解PE]的能力,并通过基因工程拼接黄粉虫肠道内菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因CD3D,培育降解塑料的“超级菌”。

(1)菌株的筛选。配制固体培养基,接种菌株后表层覆盖0.1mm厚度的PE塑料。分组实验结果如表所示:

培养基及

接种菌株

培养基1

培养基2

培养基3

单独培养并接种YT1

单独培养并接种YP1

混合培养YT1和YP1后,选取YP1接种

降解圈

(直径

D/mm)

3.5

1.8

4.2

①在筛选分解PE塑料能力大小的菌株时,应将两类菌株接种到以为唯一碳源的培养基,从功能上讲,该培养基属于。?

②筛选分解PE塑料能力强的菌株不能直接以降解圈的大小为指标,其原因是。培养基3中接种混合培养后的YP1,其降解圈直径明显加大,其原因可能是?。?

(2)培育“超级菌”。对菌株WZ改造后的CD3D基因进行研究,把CD3D基因和His标签基因(His标签由6个组氨酸组成)连接起来构建融合基因,并构建重组基因表达载体,下图为载体、CD3D基因的结构、不同限制酶的识别序列及切割位点,欲将标签基因连接在CD3D基因编码区的末端,已知组氨酸的密码子为CAU,终止密码子为UAG。

①写出His的基因编码链的碱基序列5--3。?

②为构建融合基因并将其插入载体,科研人员设计了一对与CD3D基因编码区两端序列互补配对的引物,设计时需在引物(填“A”或“B”)的5端增加相应的限制酶识别序列和His基因的编码序列,请写出该引物开头的12个碱基序列:5--3。

3.(湖南长沙模拟)为使甘蓝具有抗除草剂能力,科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株,获得抗草甘膦转基因甘蓝。

(1)草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下,采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因,应选用的引物组合为()

A.5-CTTGGATGAT-3和5-TCTGTTGAAT-3

B.5-CTTGGATGAT-3和5-TAAGTTGTCT-3

C.5-ATTCAACAGA-3和5-ATCATCCAAG-3

D.5-ATTCAACAGA-3和5-GAACCTACTA-3

(2)基因工程中最核心的步骤是(填数字编号),其目的是?。

(3)步骤②用处理农杆菌后获得感受态细胞,以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后,在步骤④的培养基中添加以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。?

(4)若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切,质粒用BamHⅠ剪切,酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式,可用酶对两种重组质粒进行剪切,通过凝胶电泳分析产物大小进行区分,如下图所示,图中(填“样品1”或“样品2”)为所需基因表达载体。?

限制酶

识别序列和切割位点

BamHⅠ

BglⅡ

EcoRⅠ

4.(福建龙岩三模)重组PCR技术是一项新的PCR技术,通过重组PCR技术能将两个不同的DNA连接成为一个新DNA分子。某科研小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB和ST1两个基因片段,利用重组PCR技