DB21T 2534-2015 鹿流行性出血病病毒荧光PCR检测方法　.pdfVIP

ICS65.020.30

B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2534—2015

鹿流行性出血病病毒荧光PCR检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofepizootic

haemorrhagicdiseaseofdeer

2015-10-15发布2015-12-15实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2534—2015

前言

标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由辽宁出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：辽宁出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：徐凤敏、万超、孙铭英、吴斌。

I

DB21/T2534—2015

鹿流行性出血病病毒实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了鹿流行性出血病病毒（EpizooticHaemorrhagicDiseaseVirusofdeer）

实时荧光PCR检测方法。

本标准适用于鹿流行性出血病病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

SN/T1193基因检验实验室技术要求

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

DEPC：焦碳酸乙二酯（Diethylpyrocarbonate）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

实时荧光PCR：荧光逆转录聚合酶链反应（RealTimeFluorescentQuantitativeReverse

TranscriptionPolymeraseChainReaction）

4原理

采用TaqMan方法，比对鹿流行性出血病病毒基因组S基因的核苷酸序列，设计特异性引

物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5端标记FAM荧光素为报告荧光基团（用R表

示），3端标记TAMRA荧光素为淬灭荧光基团（用Q表示），它在近距离内能吸收5端荧光基

因发出的荧光信号。PCR反应进入退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时

探针上R基团发出的荧光信号被Q基因所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶

段时，Taq酶的5到3的外切核酸酶功能将探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出

的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的

增长呈现对应关系。

5试剂和材料

DB21/T2534—2015

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水；所有试剂

均用无RNA酶的容器分装。

5.1试剂

5.1.1DEPC水（见附录A.1）。

5.1.20.01mol/LPBS（见附录A.2）

5.1.3Trizol裂解液。

5.1.4三氯甲烷。

5.1.575%乙