《ly基因工程练习》课件.pptVIP

*****************课程简介基因工程概要了解基因工程的基本原理和技术,为后续知识奠定基础。应用案例分析通过生动有趣的案例,深入探讨基因工程在医疗、农业、工业等领域的应用。实践操作演示安排基因工程相关实验操作演示,帮助学生掌握实验技能。小组讨论交流鼓励学生积极参与讨论,分享心得体会,增进对知识的理解。基因工程概述基因工程是一种利用生物技术手段对基因进行人工改造的学科。它涉及DNA分子的切割、连接、增殖等操作,可以实现基因的定向转移和表达调控。基因工程的发展不仅推动了生命科学的进步,也为医疗、农业、工业等领域带来了革命性的变革。这项技术的广泛应用已经成为现代生物技术的核心。DNA的化学结构DNA分子由两条反平行的单链组成,每条链都由四种核苷酸(腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶)以五碳糖和磷酸组成。该双链螺旋结构通过氢键相连,腺嘌呤与胸腺嘧啶配对,鸟嘌呤与胞嘧啶配对。DNA分子具有独特的化学结构,不仅能够自我复制,而且能够携带遗传信息,为生物体提供了遗传蓝图。DNA的复制与转录DNA复制DNA聚合酶在复制叉的作用下,将母链上的碱基配对,复制成两条完整的双链子。半保留复制新合成的DNA双链中,一条链来自原有DNA,另一条链是新合成的。转录RNA聚合酶识别启动子序列,从DNA模板上合成互补的单链RNA分子,即转录物。mRNA加工转录产物经过剪切、帽子结构的加入和多腺苷酸尾的修饰,形成成熟的mRNA。基因表达的调控转录调控通过调控RNA聚合酶的活性和转录因子的结合,可以调节基因转录的时间和强度,从而控制基因表达。这种转录层面的调控对基因表达的调控起着关键作用。转录后调控包括mRNA的稳定性调控、翻译效率调控和蛋白质的构象调控等。这些调控机制可以针对特定基因表达进行精细调节。表观遗传调控DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传机制可以改变染色质的结构,从而影响基因的可读性,达到对基因表达的长期调控。信号转导调控细胞内外信号通过复杂的信号转导通路最终会影响基因表达调控因子的活性和定位,从而实现对基因表达的动态调控。限制性内切酶与DNA连接酶限制性内切酶限制性内切酶是从细菌和古细菌中提取的酶,能够识别和切割特定的DNA序列。它们在基因工程中扮演关键角色。DNA连接酶DNA连接酶能够将DNA片段连接在一起,形成连续的DNA分子。它与限制性内切酶配合,在重组DNA技术中发挥重要作用。限制性内切酶与DNA连接酶在克隆中的应用这两种关键酶能够切割和连接DNA片段,为基因克隆和表达提供了基础,是基因工程实验的基础技术。重组DNA技术的基本原理1切割DNA利用限制性内切酶切割目标DNA2连接DNA使用DNA连接酶将目标DNA片段与载体DNA连接3导入宿主细胞将重组DNA导入大肠杆菌或酵母等宿主细胞4检测和筛选通过PCR或抗生素筛选获得重组子5表达和纯化利用宿主细胞表达并分离纯化目标基因产物重组DNA技术的基本原理包括几个关键步骤:首先使用限制性内切酶切割目标DNA序列,然后利用DNA连接酶将其与合适的载体连接,再将重组DNA导入大肠杆菌等宿主细胞,最后通过筛选和纯化获得所需的基因产物。这一过程允许我们有效地克隆和表达目标基因。载体的种类和特点1质粒质粒是自主复制的细菌环状DNA分子,常用作重组DNA的载体。它们容易取得和操作,且可以承载大量外源DNA。2病毒载体病毒载体利用病毒的感染机制将目标基因导入细胞,具有高效的转染能力。常用的有噬菌体、腺病毒和逆转录病毒等。3人工染色体人工染色体如酵母人工染色体(YAC)和细菌人工染色体(BAC),可以承载更大量的外源DNA序列。它们接近天然染色体结构,更有利于基因表达。4线粒体载体线粒体载体通过改造线粒体DNA来实现基因转移,对线粒体基因的研究和治疗有重要作用。转化与筛选1菌株转化将重组DNA导入宿主细胞2抗生素筛选利用抗生素抑制非转化细胞生长3阳性克隆鉴定通过PCR、酶切等方法确认目标基因的存在转化过程是将重组DNA导入宿主细胞的关键步骤。首先需要选择合适的菌株进行转化。然后利用抗生素筛选出成功转化的细胞克隆。最后通过PCR、酶切等分子生物学方法确认目标基因的存在。这一系列筛选手段确保了实验的成功性。PCR技术扩增DNA序列PCR技术可以快速、特异性地对目标DNA序列进行大量扩增,为后续的分析和研究提供充足的样本。检测微量DNAPCR技术极其敏感,即使只有少量的DNA也能被检测到,这对于临床诊断和司法鉴定等应用非常有价值。实现基因突变分析PCR可以帮助准确地检测出基因序列中的变异位点,为疾病诊断和治疗