仪器分析-色谱法.pdf

高效液相色谱法(HPLC)是在气相色谱和经典液相色谱的基础上，采用高压

泵、高效固定相以及高灵敏度检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。

特点：高压、高柱效、高灵敏度

2.HPLC中分离条件的选择：

a.固定相与装柱方法的选择:选粒径小的、分布均匀的球形固定相(dp≤10μ

m)首选化学键合相，匀浆法装柱

b.流动相及其流速的选择:选粘度小、低流速的流动相

c.柱温的选择:选室温25-30℃左右。太低流动相黏度增加，太高容易产生气

泡

第一节液-固色谱法

1.液-固色谱法是利用各组分在固定相上的吸附能力不同进行分离的，也称液

-固吸附色谱。

2.分离原理.：组分分子与流动相分子竞争吸附吸附剂表面活性中心，靠组分

分子的分配比不同而分离。

3.吸附剂吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性质，试样

的组成和结构以及流动相的性质等。

1）组分与吸附剂的性质相似时，易被吸附;

2）组分分子结构与吸附剂表面活性中心的刚性几何结构相适应时，易于吸

附。

吸附色谱是分离几何异构体的有效手段;不同的官能团具有不同的吸附能力，

因此，吸附色谱可按族分离化合物

4.固定相：常用的液-固色谱固定相是表面多孔和全多孔微粒型硅胶、氧化铝

等。一般采用5~10μm的全多孔型微粒。这些吸附剂的极性都比较大，对非极

性组分的保留能力较弱，与极性化合物的相互作用较强。

5.流动相：在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是极性大的试样用极性较

强的流动相，极性小的则用低极性流动相。

液-固色谱的流动相必须符合下列要求:

1）能溶解样品，但不能与样品发生反应。

2）与固定相不互溶，也不发生不可逆反应。

3）粘度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性和柱效。

4）应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测器时，溶剂要不吸收紫外光。

5）容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格尽量便宜。

第二节化学键合相色谱法

1.液液分配色谱法分离原理：根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不

同，在两溶液间进行不同分配而实现分离。分配系数较大的组分，保留值也较大。

正相分配色谱:流动相的极性小于固定相的极性。适用于极性化合物的分离。

反相分配色谱:流动相的极性大于固定相的极性。适用于非极性化合物的分

离。

将固定液机械地涂渍在担体.上组成固定相。

2.固定液的流失：

(1)尽管选用与固定液不互溶的溶剂作流动相，但在色谱过程中固定液仍会

有微量溶解。

(2)流动相经过色谱柱的机械冲击，会使固定相不断流失，即使将流动相预先

用固定相液体饱和或在色谱柱前加一个前置柱，使流动相先通过前置柱,再进入

色谱柱，但仍难以完全避免固定液的流失

3.化学键合相色谱法(CBC)：以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键

合相色谱法，简称键合相色谱法。

分离机理:分配和吸附两种作用兼有。

分类:根据化学键合相与流动相极性的相对强弱,可分为正相和反相键合相色

谱法

4.正相键合相色谱法：

1）固定相：极性键合相

2）流动相：以非极性或弱极性的溶剂为主体，加适量的极性调节剂增加选

择性

3）适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物

4）分离机制：

a.分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相的溶解

b.吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用

5）分离选择性：极性强的组分k`大，后洗脱出柱；流动相的极性增强，洗

脱能力增强，使组分k`减小，tR减小

5.反相键合相色谱法

1）固定相：非极性键合相

2）流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂

3）应用：最广，非极性至中等极性的组分

4）分离机制：疏溶剂理论—非极性溶质分子（或溶质分子中的非极性部分）

与流动相极性溶剂分子间的排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合

第三节离子交换色谱法

1.离子交换色谱法(ionexchangechromatography,IEC):.利用离子交换原理和

液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分