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1.形态和培养特征观察
采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20~24h,并进行革
兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导
2.生长条件实验
(1)耐盐性实验(NaCl浓度:0.85、1.20和1.71)(mol/L)。
(2)耐酸碱实验(pH:4.3、5.7、6.8、8.4、8.6和8.7)。
(3)温度梯度实验(温度:10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃)。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48h,记录生长状况。
3.生理生化实验
⑴过氧化氢酶测定
将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的
载玻片上,然后在其上滴加3%-—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反
应。
⑵葡萄糖产酸产气实验
在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示
剂,在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h,经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒
管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验
接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时
取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝
紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验
将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和
未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如
对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应
⑸甲基红(M.R)实验
接种实验细菌于PYG培养基,于37℃培养2天后,于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液,
如呈红色,表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验
接种新鲜的实验菌种于培养基中,37℃培养2天后,取培养液1mL在其中
加入1ml10%的NaOH,混匀,再加入3-4滴2%氯化铁溶液。数小时后,培养基表面的
下层出现红色者,为阳性
⑺柠檬酸盐
取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上,适温培养3-7天,培养基呈碱性(蓝色)者为
阳性反应,不变者则为阴性
⑻酪素水解实验
牛奶平板的制备:取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中(或用50mL脱脂牛奶),另称1.5g
琼脂溶于50mL蒸馏水中,将两液分开灭菌。待冷至45-50℃时,将两液混匀倒平板,即
成牛奶平板。将平板倒置过夜,使表面水分干燥,然后将菌种点接在平板上,每皿可点接3
-5株菌。适温培养1、3、5天,记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该
培养基时,切勿将牛奶和琼脂混合灭菌,以防牛奶凝固
⑼厌氧生长测定
将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,
生长则为阳性
(10)厌氧硝酸盐产气
接种封油:以斜面菌种用接种环接种后,用凡士林油(凡士林和液体石蜡为1:1)封管,封
油的高度约1厘M。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果:培养2-7d,观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生,
表示反硝化作用产生氮气,为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡,则只
能按可疑或阴性处理。
(11)石蕊牛奶的反应
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白,在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石
蕊在中性时呈淡紫色,酸性时呈粉红色,碱性呈蓝色,还原时则自上而下地褪色变白。观察
其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况
(12)糖发酵实验
将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.
分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。检测
时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较
颜色的变化,记录产酸的强弱.
附一些培养基:
①PY培养基(100mL):蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无
水CaCl20.2g,MgSO420.0g,K2HPO41.0g,,KH2PO41.0g,NaHCO310.0g,NaCl
2.0g](将CaCl2和
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