2025年染色体畸变检测实验报告微核技术分析.docxVIP

环境中诱变物质的微核检测

摘要：微核是间期细胞的细胞质中一种或多种圆形或杏仁状构造，是染色体发生畸变的另一种体现形式，微核发生率用来反应诱变物质对生物的遗传危害程度。本试验以大蒜根尖作为试验材料，分别以清水和一定梯度的叠氮化钠溶液作为阴性对照和阳性对照，用一定梯度的咖啡溶液和电池浸出液对试验组大蒜根尖进行诱变。最终卡诺固定液进行固定、用改良苯酚品红染色、压片后观测记录各组的微核千分率，从而理解微核检测的措施和意义以及通过检测评价环境中常见物质的诱变状况。

1.引言

微核是间期细胞的细胞质中一种或多种圆形或杏仁状构造，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核是染色体畸变的一种体现方式。许多能引起染色体断裂的理化原因，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正有关，微核发生率来反应诱变物质对生物的遗传危害程度。

微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA损伤的技术。该技术以其经济、简便、迅速、敏感、特异、精确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验措施。目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理性安全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。

本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多长处：①用鳞茎进行无性增殖，防止了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势；②分布广、材料易得，不受地区和季节的限制；③培养以便，操作简朴，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多；④价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。

近年来，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，多种各样工业废物的排出，平常生活中人类接触到的有潜在遗传毒性的物质越来越多，其中一种较为突出的就是废旧电池的污染。废旧电池中的化学物质不停渗透在环境中，其污染将持续若干年，直接或间接的影响人们的身体健康，导致很大的危害。

咖啡的重要成分为咖啡因。德国生态学《okeo-test》的研究人员发现，他们所检测的所有24种品牌的研磨咖啡和7个品牌的浓咖啡中都具有致癌物质——丙烯酰胺。检测成果发现，丙烯酰胺也存在于煮熟的咖啡中。绝大多数研究均表明咖啡与膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症有一定的关系。

为了研究电池浸出液和电池咖啡与否真正具有诱变致癌作用，本次试验通过用咖啡和电池浸出液进行大蒜诱变培养，在阴性和阳性对照设计下，计算其微核率，通过微核检测技术评价咖啡和电池浸出液的诱变状况。

2.试验材料与措施

2.1试验材料材料：大蒜

器材：培养皿、单面刀片、双面刀片、Eppendorf管、油性记号笔、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子：

试剂：冰醋酸、无水乙醇、1MHC1溶液、100mmol/LNaN?溶液、电池内部粉末、雀巢速溶咖啡粉末，改良苯酚品红。

2.2试验措施

2.2.1.取材

选用生长良好、大小相对一致的大蒜，剥成一瓣瓣后置于放清水的培养皿中。于24℃水中浸泡24-36h,选择根长整洁一致，不定根长约0.5-1cm左右的大蒜随机分组。

2.2.2处理各试验组

将试验材料分为六组，放入8ml不一样成分的培养液中，其中1组为阴性对照组，培养液为清水；2、3组为阳性对照组，培养液分别为25mmol/L、50mmol/LNaN3溶液；5——8组培养液分别为0.50g/ml浓度的咖啡和0.25g/ml浓度的咖啡以及分别添加2.5g和5.0g的电池内部粉末。将培养皿中置于20摄氏度左右室温下培养24h。

表1试验组浓度梯度的设定

阴性对照组

阳性对照组

试验组

1组

2组

3组

5组

6组

7组

8组

清水

25mmol/LNaN?

50mmol/LNaN?

0.50g/ml咖啡

0.25g/ml咖啡

2.5g电池

5.0g电池

也可以设定期间梯度，检测微核的形成状况。试验组如下

(试验组采用的诱变剂是NaN?,既是试验组，又是阳性对照组)

表2试验组时间梯度的设定

阴性对照(清水)

试验组(NaN)

1组

2组

3组

4组

5组

24h

12h

24h

36h

48h

2.2.3恢复培养24小时。

2.3.4固定

卡诺固定液中固定24小时，如不立即检测可移至70%乙醇中4℃下保留。

2.3.5制片

①根尖用1MHCl处理的10min,水洗3次。

②切取近根尖分生区的伸长区组织，用改良苯酚品红染色10min。

③压片：加上盖玻片后，用铅笔轻敲使细胞分散，最终垂直压下去。

2.3.6镜检

每个根尖计数1000个细胞，记录含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微