DB43T 2327-2022 羊肚菌菌种质量检验规程.docxVIP

ICS67.080CCSB31

DB43

湖南省地方标准

DB43/T2327—2022

羊肚菌菌种质量检验规程

Regulationsforqualityinspectionofmorchellastrains

2022-05-06发布2022-08-06实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T2327—2022

I

目次

前言 Ⅲ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4抽样 1

5感官检验 1

6杂菌及害虫检验 1

7菌种鉴定 2

8菌种活力检验 2

9栽培检验 3

10判定规则 3

11档案管理 4

附录A（资料性）羊肚菌基因组DNA提取方法 5

附录B（资料性）PCR扩增体系和扩增程序 6

附录C（资料性）羊肚菌菌种质量检验档案 7

DB43/T2327—2022

III

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南省微生物研究院、湖南湘蕈生物科技有限公司、湖南双红农科生态工程有限公司。

本文件主要起草人：许隽、喻桃生、雷潇、邵晨霞、唐少军、贺月林、靳磊、吴胜莲、杨祎、任锐、孙志光、何晓林。

DB43/T2327—2022

1

羊肚菌菌种质量检验规程

1范围

本文件规定了羊肚菌菌种质量检验的术语和定义、抽样、感观检验、杂菌及害虫检验、菌种鉴定、菌种活力检验、栽培检验、判定规则、档案管理等技术要求。

本文件适用于羊肚菌母种、原种和栽培种（以下简称“菌种”）的质量检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T12728食用菌术语

GB/T30989高通量基因测序技术规程

NY/T1284食用菌菌种中杂菌及害虫的检验

NY/T1846食用菌菌种检验规程

DB43/T1908羊肚菌简易拱棚栽培技术规程

3术语和定义

GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1

羊肚菌morchellaspp.

隶属子囊菌门（Ascomycota）、盘菌纲（Discomycetes）、盘菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）、羊肚菌属（Morchella），因其外表凹陷状似羊肚而得名。

4抽样

菌种的抽样应符合NY/T1846的规定。

5感官检验

样品的感官检验应符合NY/T1846的规定。

6杂菌及害虫检验

样品的杂菌及害虫检验应符合NY/T1284的规定。

DB43/T2327—2022

2

7菌种鉴定

7.1菌丝体培养

将活化的羊肚菌菌块接种于液体土豆培养基，20℃静置培养7d～10d，然后收集菌丝体，用无菌水反复清洗干净，再用灭菌滤纸吸干水分，直接使用或-20℃保存。

7.2基因组DNA提取

基因组DNA的提取方法参见附录A，得到的DNA浓度不宜低于50ng/μl，1.7A260/A2802.0。

7.3PCR扩增

选择ITS通用引物ITS1/ITS4：TCCGTAGGTGAACCTGCGG/TCCTCCGCTTATTGATATGC。PCR扩增体系和扩增程序参见附录B。

7.4电泳检测

采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，用凝胶成像系统拍照并记录电泳条带，黑色羊肚菌类群（包括梯棱羊肚菌、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌等）条带应为800bp，条带大小正确且无其他杂带的样品应进行双向测序，测序方法应符合GB/T30989的规定。

7.5数据库比对

获得的测序结果应在NCBI数据库进行Blastn比对（/），或者在RDP数据库进行Classifier比对（/classifier/classifier.jsp），初步分析测序菌种的分类地位。

7.6系统发育树的构建

下载准确的的羊肚菌I