沙门氏菌检验详细流程.ppt

关于沙门氏菌检验详细流程沙门菌概况沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门菌属。沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。我国发现的有250多个血清型。第2页,共27页，星期六，2024年，5月沙门菌的分类根据生化反应不同，分为2个种：肠道沙门菌（Samonellaenterica）： Ⅰ肠道亚种（subsp.enterica）Ⅱ萨拉姆亚种（subsp.salamae）Ⅲ亚利桑那亚种（subsp.arizonae）Ⅳ豪顿亚种（subsp.houtenae）Ⅵ因迪卡亚种（subsp.indica）邦戈尔沙门菌（Samonellabongori）Ⅴ第3页,共27页，星期六，2024年，5月沙门菌种和亚种的鉴别项目肠道沙门菌邦戈尔沙门菌ⅠⅡⅢⅣⅥⅤ卫矛醇＋＋－－－＋山梨醇＋＋＋＋－＋水杨苷－－－＋－－ONPG－－＋－－＋丙二酸盐－＋＋－－－KCN－－－＋－＋注：+为阳性-为阴性第4页,共27页，星期六，2024年，5月沙门氏菌的血清分型迄今为止沙门氏菌有57个O抗原116个H抗原Vi抗原被分成2500多个血清型。Vi抗原O抗原H抗原第5页,共27页，星期六，2024年，5月沙门氏菌命名与书写方式目前的命名方法规定：肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠伤寒血清型应书写为Salmonellaentericasubsp.entericaserotypeTyphimurium，但在实际工作中，可简写为S.Typhimurium。其他沙门氏菌均不给专用名，只在亚种数字名后直接书写抗原式，比如S.Ⅴ66:z35:-新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉堡卫生研究所及美国CDC3个实验室的一致同意。第6页,共27页，星期六，2024年，5月沙门氏菌检验程序第7页,共27页，星期六，2024年，5月目的：修复损伤的细菌细胞；方法：25g（mL）样品＋225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如使用均质袋，可直接进行培养。于36℃±1℃培养8h～18h。前增菌第8页,共27页，星期六，2024年，5月无菌均质袋第9页,共27页，星期六，2024年，5月轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mLTTB内,于42±1℃培养18～24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36±1℃培养18～24h。分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36±1℃分别培养18～24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板)或40h～48h(BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。选择性增菌与分离第10页,共27页，星期六，2024年，5月分离培养基回收率测定（%）进口-SS65.3进口-SS81.0国产-SS52.0进口-HE83.2国产-HE80.0进口-XLD83.0国产-XLD86.2进口-BS106.6国产-BS77.7CHRO显色68.4国产-DHL98.4国产-WS71.6TSA（对照）100.0第11页,共27页，星期六，2024年，5月典型菌落--BS菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。国产BS进口BS第12页,共27页，星期六，2024年，5月典型菌落--HE国产HE进口HE蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色。第13页