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革兰染色实验报告

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实验原理:

1)G+菌细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易透入;同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障,阻止结晶紫—碘复合物从胞内渗出。G-菌得细胞壁结构疏松,肽聚糖层很薄,而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂质,易被乙醇溶解,导致细胞壁通透性增加,胞内结晶紫-碘复合物被乙醇溶解析出而脱色。

2)G+菌等电点(PI2~3)比G-菌(PI4~5)低,在相同PH条件下,G+菌所带负电荷比G-菌多,故与带电得结晶紫染料结合牢固,不易脱色。

实验步骤:

一、标本得制备:

1、涂片:

取玻片在火焰上稍微加温,以清洁纱布擦净,放置桌上,左手握菌种管,有搜持接种环,用无菌接种环取生理盐水一滴,置于载玻片得中央,再用接种环在火焰上灭菌,待冷却后,取斜面培养得葡萄球菌或大肠杆菌少许与盐水混匀,直接取1~2环菌液作涂片即可,涂片应厚薄均匀。接种环采菌后,要通过火焰灭菌才能放下。

2、干燥:

目得就是就是菌体水分慢慢蒸发,固定菌形。涂片最好在室温中自然干燥,必要就是将标本面向上,小心断续在弱火高处略烘,以助水分蒸发;但切勿紧靠火焰,以致标本烤枯,不堪检视。

3、固定:

手执玻片一端,标本面向上,在火焰外层快速地来回通过三次,共2-3秒,以玻片反面触及皮肤不觉过烫为度。冷却后,染色。目得就是杀死细菌,就是菌体与玻片粘附较牢以及改变对染料得通透性,因活得细菌一般不能使许多染料进入细胞。

二、染色

1、初染:

将涂片标本夹持于左手,滴加结晶紫溶液盖满涂抹面,染色1~3分钟,用流水缓缓冲洗(即将龙头打开使水缓慢流出,将玻片倾斜使水在玻片面上端沿玻片流下冲洗染液)直至无颜色流下为止。

2、媒染:

加卢戈氏染液4~5滴作用30秒到一分钟,再按上法冲洗,并将片上积水轻轻洒净。

3、脱色:

在95%酒精缸中脱色约3~5秒,拿出玻片使酒精由玻片流下,如此反复2~3次,直至流下酒精略呈淡紫色为止,现按上法以流水冲洗,并将玻片轻轻洒净。

4、复染:

用稀释石炭酸-复红(或沙黄液)复染半分钟后按上法冲洗。

5、镜检。

实验结果:G+葡萄球菌被染成紫色;G-大肠杆菌被染成红色。

实验分析:实验中有些组得大肠杆菌被染成了紫色,而实际却应该为红色,这有可能与脱色得时间过少有关,因而将其染成紫色,成为假阳性。

还有一些组将葡萄球菌染成红色,这又可能就是由于脱色时间过长,冲洗得时间过短所导致得。

G+葡萄球菌(100*)

G+链球菌(100*)

G—大肠杆菌(100*)

G—霍乱球菌(100*0