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君子忧道不忧贫。——孔丘

流感病毒的分离技术操作规范

病毒分离培养是流感样病例病原学监测的基础，是流感病毒

检测最常用和最可靠的方法之一。目前多采用鸡胚和MDCK细

胞进行流感病毒分离。

通过鸡胚分离的流感毒株与原始标本的抗原性和基因特性

可能会有所不同，而通过MDCK细胞所分离的流感病毒与原始

“0”MDCK“0”

标本相似。另外由于相毒株的重现，细胞对相毒株

的敏感性远高于鸡胚，所以MDCK细胞已成为流感病毒分离不

可缺少的一种宿主系统。但是目前全球主要使用鸡胚进行流感疫

MDCK

苗生产，分离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产，

因此鸡胚分离仍然发挥着举足轻重的作用。具备流感病毒分离能

力的流感监测网络实验室收到哨点医院的常规监测标本后，要求

利用状态良好的MDCK细胞和（或）鸡胚进行病毒分离。若同

时进行MDCK细胞和鸡胚分离，为减少工作量，可先用MDCK

MDCK

细胞对原始标本进行筛选，细胞病毒分离结果为阳性后，

再将另外一份-70℃或以下温度保存的原始标本进行鸡胚双腔接

种（羊膜腔和尿囊腔），进行病毒分离。

（-）实验室生物安全级别和生物安全规定

1.流感病毒分离实验室生物安全级别：季节性流感病毒和

2009甲型H1N1流感病毒生物安全二级；高致病性禽流感病毒

生物安全三级。

君子忧道不忧贫。——孔丘

2.

流感病毒分离实验室生物安全规定

应当遵守生物安全实验室的有关生物安全的规定。

（二）流感病毒的细胞分离标准操作规程（所列试剂生产厂

家及货号仅供参考）

1.试验材料

（1）刚75-90%成片的MDCK细胞，T-25细胞瓶

（2）TPCK处理胰酶（牛胰腺来源VIiI型）

（S1GMAT8802）

（3）HEPES缓冲液,IM母液

,

（4）D-MEM培养基（高糖，含有1-谷氨酰胺），Hanks

液

（5）青、链霉素母液（10,000U∕m1青霉素

G,10,000μg∕m1硫酸链霉素）

（6）牛血清白蛋白组分V,7.5%溶液

（G1BCOCatNo15260）

（7）0.5m11

处理好的临床标本（标本处理参见附件第

一部分）

（8）无菌移液管：Im1和Iom1

2.

培养基和试剂的准备（建议：经常检查试剂的有效期）

（1）50Om1D-MEM液中加入