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附录B

（资料性附录）

男性生育功能检查方法及其结果评价

B.1男性生育功能检查

B.1.1精液检查及方法

精液采集应在私密的房间内进行，采集前禁欲至少2天，最多7天。应至少重复检测2～3次，每次间隔7天～3周。

B.1.1.1精液的外观

正常的精液质地均匀、呈灰白色，禁欲时间长时精液可略带黄色。如果精子浓度非常低或无精子，精液可能显得透明些。含有红细胞的精液可呈红褐色。如有黄疸或服用某些维生素，精液可呈黄色。

B.1.1.2精液的体积

推荐采用称重的方法计算精液的体积:预先测定空容器的重量，采集精液后再次称重，减去原始重量得到的差值即为精液的重量，再除以精液比重就可计算精液的体积，精液的实际比重约为1.014g/mL，实际工作中可用1g/mL替代；此外也可以将精液收集在广口带刻度量筒中直接读取精液体积。不推荐采用将容器中的精液转移到量筒或注射器中测定精液体积的方法，以免低估精液体积。正常男子每次射精量≥1.5mL。在没有精液丢失的前提下，如果精液体积过少，应考虑先天性双侧输精管缺如、射精管梗阻等可能性。

B.1.1.3精子浓度和精子总数

精子总数是精子浓度与精液体积的乘积，因此准确测定精子浓度十分重要。推荐采用改良Neubauer血细胞计数板测定精子浓度，检测前必须充分混匀精液标本，分别两次取样、两次稀释、两次检测。首先按事先估计的稀释倍数将精液稀释。标准稀释液的配制方法是:将50gNaHCO3和10mL35%甲醛溶液加入1000mL纯水中，如果需要可添加0.25g台酚蓝或5mL饱和甲紫溶液(＞4mg/mL)加深背景显示出精子头部，4℃保存备用。向计数板吹气使其轻微湿润，再将盖玻片紧压向计数池的支柱，确保盖玻片紧贴计数池。用移液器吸取10μl刚刚稀释好的精液，将移液器吸头小心地接触一个计数池V形槽的下缘，利用毛细作用使精液标本充满计数池。计数池不应过满或不满，也不应移动盖玻片。同样将10μl标本加入到另一个计数池中。将血计数板水平放在湿盒内至少4min后开始计数。计数应使用200或400倍的相差显微镜，每份样本检测200个以上的精子以减低误差。应计数有完整结构的精子(有头和尾)，有缺陷的精子(大头针状头或和无尾的精子头)应分开计数并记录。

血细胞计数板每个计数池共有9个网格，其中中央网格有5排，每排5个大方格。计数时，先评估一个计数池的中央网格，逐排计数，直到至少数到200个精子，并数完完整的一排。如果中央网格的5排中计数未满200个精子，那么还需计数与中央网格相邻的网格，直到数完至少200个精子。对于位于相邻两格分界线上的精子，只计数位于方格上界和左界的精子，而不计数位于下界和右界的精子。然后计数另一个计数池中相同体积的标本，计算两个计数池计数结果的总数和差异。两次计数之间的差异应在95%可信区间内，如变异过大应重新混匀标本再重复取样计数。计算两次计数的平均数作为最终的检查结果。根据精液稀释倍数计算原始精液中的精子浓度。

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B.1.1.4精子活力

精子的前向运动情况与受孕有密切的关联。在第5版手册中，将精子活动力分为前向运动(PR)、非前向运动(NP)、不活动(IM)。应在室温或带有加热37℃载物台的显微镜下进行精子活动力评估。要准确地评估精子活动力，应将精液充分混匀后，重复取样2次分别检测，先仔细观察网格区计数前向运动精子，接下来是在相同的网格内的非前向运动精子，最后是不活动精子。每个样本至少系统地观察5个视野，分析的精子应＞200个。两次分析结果之间的差异应在95%可信区间内，如果两个样本之间的差异过大，则应重新混匀标本后重复取样检查。第5版手册将PR≥32%、(PR+NP)≥40%作为精子活动力的参考值下限，低于此下限时受孕的机会减低。

B.1.1.5精子形态学评估

染色后使用1000倍油镜在亮视野下观察，应系统地选择涂片上多个区域进行评估，应评估每个视野中的所有精子，每张涂片至少评估200个精子以减低误差。两个重复取样的检查结果之间的差异应在95%可信区间内，计算其平均数作为标本的正常形态百分率。检测时仅评估具有头部和尾部的完整精子，不计数未成熟的生殖细胞。重叠的精子和头部枕在其他颗粒边缘的精子也不应评估。正常形态精子的参考值下限为4%。对所有异常形态精子进行分类，可能有助于临床和研究工作。可注明精子缺陷的类型并计算不同缺陷精子的百分比。游离的精子头部或尾部不作为精子计数，也不作为异常精子进行计数。如果所有精子都呈现一种特定的结构缺陷，比如小圆头精子、无尾精子头或大头针状精子，应予以正确的报告。

正常精子形态学：精子包括头、颈、中段、主段和末段。光学显微镜下难以观察精子末段，