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吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案

(试行)

本方案旨在为全国流感监测网络实验室提供甲型H1N1流感病毒实验室检

测技术方案，不用作商业活动或赢利目的。

一、标本的采集种类和规定

1、推荐采集的呼吸道标本种类

疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗

液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液，并立即

用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并立即送至实验室。（临床样品采集人

员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文献。）采样同时填写疑似人感染

甲型H1N1感染病例标本采样单。（附表1）

2、拭子的选择

标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。

不推荐棉拭子和木柄。标本采集管应包含3毫升病毒采样液（具有蛋白质稳定剂，

阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）

3、临床标本储存规定

保存在4℃（不能超过4天）或者-70℃或-70℃以下。有条件的实验室均

应保存在-70℃或-70℃以下。不应保存在-20℃。

4、标本的分装解决

标本送至实验室后，立即进行解决，避免反复冻融。将原始标本分为三份，

一份用于核酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复核。

5、标本的运送

疑似人感染甲型H1N1感染病例列为A类，用UN2814包装运送。填写

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疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单（附表2）。

二、核酸检测

基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病

应急工作中发挥了巨大作用。

1、基于real-timeRT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和

探针序列为美国CDC设计）：

4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对本次甲型H1N1流感

病毒的real-timeRT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病

例的呼吸道样本,因此，用此real-timeRT-PCR的方法，建议一方面筛选甲型

流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。real-timeRT-PCR方法

参见附件3（中文翻译版），附件4（英文原版）。

2、基于RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物序列为国家流感

中心设计）：

目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N1流感病毒。

RT-PCR的方法参见附件5。

三、病毒分离鉴定

可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病毒分离。具有相应条件的网络实验

室在收到标本后24h内进行病毒接种。具体方法参见附件6和7。

四、合用于实验室工作人员的甲型H1N1流感病毒生物安全

（一）实验室级别及个人防护