DB21_T 3717-2023 李、杏品种鉴定SSR分子标记法.docx

ICS65.020.20CCSB05

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辽宁省地方标准

DB21/T3717—2023

李、杏品种鉴定SSR分子标记法

2023-04-30发布2023-05-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

DB21/T3717—2023

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。

本文件起草单位：辽宁省果树科学研究所。

本文件主要起草人：刘硕、刘宁、刘威生、章秋平、张玉萍、马小雪、张玉君、徐铭、赵海娟、刘家成。

本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024

文件起草单位通讯地址：辽宁省果树科学研究所（辽宁省营口市鲅鱼圈区熊岳镇铁东街），联系电话：0417-7033462。

I

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李、杏品种鉴定SSR分子标记法

1范围

本文件规定了利用简单重复序列（Simplesequencerepeats，SSR）分子标记法进行李（Plum）、杏（Apricot）品种鉴定的主要仪器设备与试剂耗材、试剂配制、参照种质、操作步骤、基因型对比、结果判定等要求。

本文件适用于利用SSR分子标记指纹对比快速鉴定李、杏种质资源。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则

GB/T19557.30植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南梨

GB/T30988多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法

GB/T30989-2014高通量基因测序技术规程

GB/T37870个体鉴定的高通量测序方法

NY/T2594植物品种鉴定DNA分子标记法总则

3术语和定义

NY/T2594界定的术语和定义适用于本文件。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。bp:碱基对（Basepair）

CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylammoniumammoniumbromide）ddH2O：重蒸馏水（Distilledanddeionizedwater）

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

Hi-Di：去离子甲酰胺（Highlydeionizedformamide）nt：碱基（Nucleotide）

PCR：多聚酶链式反应（Polymerasechainreaction）PVP：聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone）

TE：Tris-EDTA缓冲液（10mMTris，1mMEDTA，pH8.0）

5原理

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李、杏的不同种质资源，其基因组存在着能够进行稳定遗传的简单重复序列SSR的重复次数差异。这种差异可以通过从抽取具有代表性的检测样品种提取DNA，利用SSR引物进行扩增和电泳，通过检测其扩增产物片段大小加以区分。

6主要仪器设备与试剂耗材

高速离心机、分光光度计等主要仪器设备，氯仿、异戊醇等试剂，移液枪配套枪头、枪头盒等耗材，具体见附录A。

7试剂配制

试剂配制方法见附录B。

8SSR引物

用于李、杏品种鉴定的优异SSR引物有45对，见附录C。退火温度55℃-57℃。

9参照品种

参照品种见附录D。

10操作步骤

10.1样品准备

受检及参照李、杏品种样品均采集幼嫩叶片，按照GB/T30988-2014，8提取步骤改良。每份待测品种和参照品种选取3个单株进行混合分析。于春季分别自每个样株上采集新鲜、幼嫩、健康的叶片两片（约1g）混合置于离心管，做好标记置于液氮中浸泡后，保存于-80℃冰箱。

10.2DNA提取

采用改良CTAB法提取李、杏样品DNA；或利用植物基因组DNA提取试剂盒依照说明书进行提取。在通风环境或通风橱进行提取。改良CTAB法DNA提取步骤如下：

a)