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非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮
染色方法总结
AgNOR染色法:
1、试剂配制：
（1）AgNOR染色液：
甲液：明胶2g溶于双蒸水至99ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1ml
摇匀待用。
乙液：硝酸银50g溶解于双蒸水中至100ml，4℃冰箱保存。
（2）AgNOR工作液
取甲液10ml，乙液20ml临用前混合。
2、步骤：
（1）切片脱蜡至水
（2）双蒸水洗2次
（3）AgNOR工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）
（4）双蒸水洗3次
（5）脱水,透明,封固
3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B
鞭毛染色法:
１．试剂配制：
甲液：丹宁酸５克
氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克
福尔马林（１５％）２．０毫升
氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升
乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克
蒸馏水１００毫升
制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液
中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为
止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，
继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银
盐沉淀，不宜使用。
２．染色方法：
（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，
备用。
（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环
挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两
水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。
（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲
去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液
出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。
（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮
３．注意事项：
（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。
（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。
（３）防止水及培养物沾有氯化物。
（４）切忌用接种环涂抹培养物。
（５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２
４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。
（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。
概述：大肠杆菌的标志基因LacZ编码β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase；
ß-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶
非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此β-半乳糖苷酶成为
目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。X-Gal
（5-bromo-4-chloro-3-indoyl-ß-D-Galactopyranoside）是生物化学中常用的
一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将X-Gal转化为蓝色的产物，由此用它作为生
色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定原始组织β-半乳糖苷酶的活性，从
而通过光学显微镜鉴别转染后组织细胞报告基因的存在与否和强弱表现。全组织
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