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南京椴组培育苗技术规程

1范围

本标准规定了南京椴组织培养技术中外植体选择与处理、腋芽诱导、继代增殖、生根培养、炼苗、移栽和移栽后管理的技术要求。

本标准适用于南京椴的组织培养快速繁殖。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB6001育苗技术规程

3外植体选择与处理

3.1外植体母株选择

选择生长健壮且无病虫害的母株。宜选择1年生苗龄的实生容器苗，不宜选择其他苗龄，忌用地栽苗。

3.2外植体母株管理

于3月份，将腋芽尚未萌发的南京椴容器苗，移至玻璃温室培养。使用培养架将容器苗底部隔离地面50cm。每隔10d，喷洒多菌灵1次，使用40%多菌灵可湿性粉剂500～800倍液。切忌将容器苗地表放置，以免根系扎入带菌土壤中生长。

3.3外植体选择

外植体母株枝条未木质化之前，剪下枝条，去除叶片，保留1cm长叶柄，作为外植体。主干基部保留3-4个饱满的腋芽。

在8月初、9月初与10月初，可重复3次外植体取样。

3.4外植体消毒

先用毛刷对枝条表面刷洗，并通过清水冲洗干净。再用84消毒液（稀释50倍），在摇床上振荡消毒15-20min，并通过流水冲洗20-30min。于无菌操作台上，用75％乙醇消毒50-60s，然后立即倒入0.1％的升汞消毒10min，最后无菌水洗涤4次，每次振荡3-5min。

3.5外植体分段

将消毒后的枝条，切割成0.6cm长的茎段，每段带1个腋芽。

4腋芽诱导

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将茎段接种于诱导培养基中进行初代诱导，培养温度为25℃,首先在黑暗中培养24小时，然后光照培养20天：光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000lx，所述初代诱导培养基为WPM培养基，添加的激素水平为：6-BA0.2mg/L+KT0.1mg/L+IBA0.04mg/L+GA30.2mg/L，诱导培养基PH为5.8。

5继代增殖

初代培养20d后，将10cm高的初代苗切割为1cm茎段，每茎段带1腋芽，切除叶片，接入继代增殖培养基，进行不定芽诱导，继代培养20天，培养温度为25℃,光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000lx，继代增殖培养基为WPM培养基，并添加反式玉米素0.2mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L，培养基PH为5.8。

6生根培养

继代培养40d后，南京椴无根试管苗进行切分，每株均有2个不定芽，接入生根培养基中进行生根培养20天，培养温度为25℃,光照时间为10-16小时/天，光照强度为2000Lx，生根培养基1/2MS培养基，并添加IBA3.0mg/L+NAA1.0mg/L，培养基PH为5.8。

7炼苗培养

当生根苗的不定根长至4cm左右，生根数在4-8根时，将组培瓶从培养室取出，不打开瓶盖，在温室或荫棚驯化3d，环境遮光度为60%。驯化后打开瓶盖，继续驯化2d后从瓶中取出组培苗，洗净根部培养基后用40%多菌灵可湿性粉剂（500～800）倍液浸泡20min。

8移栽

8.1栽培基质选择

基质成分为重量比1:3:2的黄心土、珍珠岩和草炭土。

8.2栽培容器选择

采用50孔穴盘，圆形口、尖底的5cm×11cm穴盘。旧穴盘需消毒后才可使用。

8.3移栽方法

组培苗上方使用带孔PVC膜覆盖保湿，放在通风阴凉处培养20-30d，培养到第15d将PVC膜移除，换用折光率75%的遮阳网。

9移栽后管理

9.1光照管理

初始光照强度宜在5000lx左右，15d后将光照提高至15000lx。

9.2温度管理

移栽苗培养温度为18℃~28℃,以25℃恒温为最佳。

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9.3水分管理

移栽苗初始培养湿度范围为70％～85％，培养30d后，将湿度控制在50%～75％。

9.4消毒与施肥管理

每隔10d喷1次多菌灵1000倍液。每隔15d喷施可溶性完全肥料（N:P:K=3:1:1）1000倍液1次。

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附录A

（规范性附录）

WPM培养基母液成分组成

名称

成分

含量（mg/L）①

单位母液加入药品（g）

0.5L

1.0L

1.5L

2.0L

大量

K2SO4

990

9.9

19.8

29.7

39.6

MgSO4?7H2O

370

3.7

7.4

11.1

14.8

KH2PO4

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