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为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。——张载
PCR技术综述
08生工
李国辉
聚合酶链反应（polymerasechainreaction简称PCR）又称无细胞分子克隆系统或特
异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高
温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅
速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是基因扩增技术的一次重
大革新。
PCR技术可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和
检测能力，能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方
法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广泛应用和迅速发展。
1、PCR技术的发展简史
人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。20世纪60年代末70年代初，人们
致力于研究基因的体外分离技术。但是，由于核酸的含量较少，一定程度上限制了DNA
的体外操作。Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与
合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。但是，
当时的基因序列分析方法尚未成熟，对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现，寡
核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段，这种想法似乎没有任何实际意义。
1985年，美国科学家KaryMullis在高速公路的启发下，经过两年的努力，发明
了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。其原理类
似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件摸板
DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲体系，DNA变性、复性及延伸的温度与时间。
从此，PCR技术得到了生命科学界的普遍认同，KaryMullis也因此而获得1993年的
诺贝尔化学奖。
但是，最初的PCR技术相当不成熟，在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看
不中用”的实验室技术。1988年初，Keohanog改用T4DNA聚合酶进行PCR，提高了扩
增的真实性。尔后，Saiki等人又从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热
的DNA聚合酶，使得PCR技术的扩增效率大大提高。也正是由于此酶的发现使得PCR
技术得到了广泛地应用，使该技术成为遗传与分子生物学分析的根本性基石。
在以后的几十年里，PCR方法被不断改进：它从一种定性的分析方法发展到定量
测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段。到
目前为止，PCR技术已有十几种之多，例如，将PCR与反转录酶结合，成为反转录PCR，
将PCR与抗体等相结合就成为免疫PCR等。
2、PCR技术的基本原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可
以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成
同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低
后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做
启动子，加入DNA聚合酶、dNT
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