水环境卫生细菌学检测—大肠菌群检验.pptxVIP

大肠菌群检验

;教学内容;教学目标;一、大肠菌群检验原理与程序;检验程序：

乳糖发酵检验

伊红美蓝平板分离检验

革兰氏染色;准备工作：

（1）制备培养基

乳糖蛋白胨培养液：

成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、水1000ml，溴甲酚紫乙醇液（16g/L）1ml。

制法：调pH7.2~7.4后加入溴甲酚紫乙醇液，分装于装有倒管的试管中（每管10ml）。115℃20min。

二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：除水外加倍。;伊红美蓝培养基：

成分：蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20g、水1000ml，乳糖10g；伊红水溶液（20g/L）20ml、美蓝水溶液（5g/L）13ml。

制法：调pH7.2后加入乳糖，115℃20min。倒平板前加入伊红美蓝。

制备无菌生理盐水。

（2）培养皿、试管、移液管等玻璃器皿的灭菌；;

生活饮用水——原始水样，接种10ml到双料液中（或加1个10倍无菌生理盐水稀释液，接种1ml到单料液中）。

出厂自来水——原始水样接种10ml到双料液中，1ml10倍无菌生理盐水稀释液接种到单料液中。

水源水——10倍无菌生理盐水递交稀释到10－3，3浓度各1ml接种到单料液中；污染严重可加大稀释度。

每个样品接种均为5重复。;

36℃培养24h。

产酸（变黄色）产气者报告为乳糖检验阳性，进入下一步检测。;

取发酵液接种到伊红美蓝培养基平板（划线分离），36℃培养24h。

具备下列大肠菌群典型菌落特征的为阳性管：

有核心，带金属光泽，深紫色；

深黑色、不带或略带金属光泽；

淡紫红色、中心较深。;

大肠菌群Ｇ-

或复发酵（乳糖蛋白胨培养液培养）产酸产气。;

经过前面三个环节的检验，得到证实的各稀释度的大肠菌群阳性管数；

查阅总大肠菌群MPN检索表，得到MPN/100ml值；

再乘以测定3稀释度中的最小稀释倍数，报告数值；

如果所有乳糖发酵管均为阴性，则报告未检出。;六、任务考核;大肠埃希氏菌检验

;教学内容;教学目标;一、关于大肠埃希氏菌;

根据大肠埃希氏菌（大肠杆菌）不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类：

肠致病性大肠杆菌（EPEC）

肠产毒性大肠杆菌（ETEC）

肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）

肠出血性大肠杆菌（EHEC）

肠黏附性大肠杆菌（EAEC）

弥散粘附性大肠杆菌(DAEC);相对于大肠菌群、耐热大肠菌等微生物，只有大肠埃希氏菌是粪源特异性的，是最准确和专一的粪便污染指示菌。;检样乳糖发酵;准备工作：

1．培养基：

乳糖蛋白胨液体培养基（同大肠菌群检验）

EC-MUG培养基：

胰蛋白胨20g、乳糖5g、3号胆盐或混合胆盐1.5g、磷酸氢二钾4g、磷酸二氢钾1.5g、氯化钠5g、4－甲基伞形酮－β－D－葡萄糖醛酸苷（MUG）0.05g，pH6.9。

分装试管中，115℃20min。

2．无菌玻璃器皿等用具。;

操作要求：

EC-MUG结果观察：

将EC-MUG培养基管在暗处用波长为366nm紫外灯照射，有蓝色荧光的为阳性。

其它操作要求，请参考大肠菌群的检验。;三、任务考核