免疫组化SP法与SABC.pdfVIP

操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰

素标记的第二抗和生物素标记的酶。但是此法注意内源性生物素活性的消除，以减少

非特异性的染色。

SP法：是采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的碱性磷酸酶及底物

色素混合液来测定细胞或组织中的抗原。PA是一种金黄色葡萄球菌细胞

壁分离的蛋白质，它能与各种动物的IGG的FC段结合，在免疫组化中可作为桥抗体或

标记抗体。最大的优点是不受种属的特异性限制。此法还具有染色时间

短、灵敏度高、背景染色淡等优点，分子量小，易于穿透组织。

两者本质的区别是：SABC4的“三抗”是SABC复合物即链酶亲和素一生物素一过氧化

物酶复合物；而SP法的“三抗”是过氧化物酶直接与链酶亲和素相连的，没有通过生

物素的中介连接。

SAB%骤：

切片常规脱蜡、脱水；30%H2O3蒸储水10份混合，室温5—10分钟以灭活内源性酶，

蒸储水洗；将切片浸入0.01M枸檬酸盐（PH6.0）,微波炉加热至沸腾后断电，间隔10

分钟，反复两次进行热修复抗原；滴加5%BSA封闭液，室温20分钟；滴加一抗，37cl

小时30分钟孵育；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG,室温下20分钟，PBS（PH7.2-7.6）洗；

滴加试剂SABC室温下20分钟，PB创5分钟X4次；DABS色：取1ml蒸储水，加试剂

盒中A,B,C试剂各1滴，混匀后加至切片，室温显色18分钟；苏木素轻度复染；脱水，

透明封片。显微镜下观察。

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通

过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一

项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！

SP法

1）脱蜡、水化；

2）PBSgfc23次各5分钟；

3）3%H（80刈醇）7加在TMAk,室温静置10分钟；

2

4）PBSgfc2〜3次各5分钟；

5）抗原修复；

6）PBSgfc2〜3次各5分钟；

7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。

8）滴加I抗50膜，室温静置1小时或者4c过夜或者37cl小时。

9）4c过夜后需在37c复温45分钟。

10）PBSa3次各5分钟；

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II抗4050屋，室温静置，或37C1小时;

12）II抗中可加入0.05%的tween-20。

13）PBSa3次各5分钟；

14）DAB®色5〜10分钟，在显微镜下掌握染色程度；

15）PBSE自来水冲洗10分钟；

16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；

17）自来水冲洗10〜15分钟；

18）脱水、透明、封片、镜检。

SABCM

1）脱蜡、水化。

2）PBSSfc两次各5分钟。

3）用蒸储水或PBS配置新鲜的3%HD,室温封闭5〜10分钟，蒸储水洗3次。

4）抗原修复。

5）PBSgfc5分钟。

6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。