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夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定

目的建立夏枯草药材中熊果酸含量的超高效液相色谱法（UPLC）测定方

法。方法采用UPLC进行测定，色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18（2.1

mm×100mm，1.7μm），以甲醇-0.5%冰乙酸水为流动相进行等度洗脱，流速为

0.3ml/min，柱温30℃，检测波长210nm。结果熊果酸在0.2461～0.4922mg

范围内呈良好的线性关系（r2=0.9999），平均回收率为99.29%，RSD=1.74%，熊

果酸在夏枯草中的含量为0.28%～0.53%。结论该方法快速、高效、重现性好，

可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

标签：夏枯草；熊果酸；超高效液相色谱法；含量测定

夏枯草为唇形科植物夏枯草（PrunellavulgarisL.）的干燥成熟果穗，味辛、

苦，性寒，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效[1]。夏枯草的主要化学成分

有三萜、黄酮、甾体、香豆素、蒽醌、苯丙素等[2]。其中的主要成分熊果酸具

有镇静、抗溃疡、降低血糖、抗炎、抗菌等多种生物学效应[3-5]。近年来，又发

现熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用，极有可能成为一

种新型抗癌药物[6-8]。另外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛用作医药

和化妆品原料[9]。

目前关于夏枯草药材的质量控制研究主要是以熊果酸、齐墩果酸和迷迭香酸

等的HPLC含量测定和夏枯草药材的HPLC指纹图谱为主[10-14]，关于夏枯草

超高效液相色谱法（UPLC）含量测定的研究还未有报道，且相比于传统的HPLC

而言，UPLC具有柱效高、分离度好和分离快等优点，大大缩短了样品运行的时

间，可以满足当下高通量分析的要求。因此，本实验采用UPLC建立夏枯草药材

中熊果酸含量测定方法[15]，测定不同批次的夏枯草药材中熊果酸的含量，该方

法灵敏度高，分离度好，重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的

手段。

1实验材料

1.1仪器

SK3300H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），T-214型电子分

析天平（Denver公司），WatersAcquityUPLCH-Class超高效液相色谱系统、

Empower工作站、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器（Waters公司）。

1.2试剂

甲醇（色谱纯，Sigma公司），冰乙酸（色谱纯，天津市化学试剂研究所），

水为怡宝纯净水。对照品熊果酸为本课题组自制，纯度98%。

1.3材料

15份夏枯草样品均由广州白云山星群（药业）股份有限公司提供，经中药

鉴定教研室龚力民老师鉴定为唇形科植物夏枯草。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm），以甲醇

-0.5%冰乙酸水（80∶20）为流动相系统进行等度洗脱，检测波长为210nm，流

速0.3ml/min，柱温30℃，进样量1μl。

2.2对照品溶液的制备

精密称取熊果酸对照品10.70mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇10ml定容

至刻度，密塞，摇匀，即得（每毫升对照品溶液含熊果酸1.07mg）。

2.3供试品溶液的制备

称取夏枯草粉末约1.0g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶中，加入甲醇

10ml，密塞超声30min，放冷至室温，用甲醇补足重量，摇匀，0.22μl微孔滤

膜滤过，即得。

2.4线性关系考察

精密吸取对照品溶液0.2、0.25、0.35、0.4、0.5ml，分别置于1ml容量瓶

中，用甲醇定容，摇匀。分别取对照品溶液1μl注入UPLC色谱仪，按上述色

谱条件测定熊果酸峰面积积分值，以对照品峰面积积分值为纵坐标，对照品含量

为横坐标绘制标准曲线。计算熊果酸的回归方程：Y=1.10×106X+6.93×104

（r2=0.9997），线性范围0.2461～0.4922mg。

2.5方法学考察

2.5.1精密度实