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WatersHPLC2695操作规程

一、日常开机步骤

1.制备新鲜流动相和清洗液

流动相

水娃哈哈纯净水。

缓冲剂首先溶解盐，调节pH值，然后过滤除去不溶解的物质，缓冲盐

浓度≤100mMol。

四氢呋喃使用不稳定的THF时，请确保溶剂是新鲜的。先前打开过的

THF瓶含有过氧化物杂质，将导致基线漂移。

有机相原装进口的色谱纯。

清洗液

洗针液

根据样品和流动相的化学性质选用洗针液，确保所有溶液和缓冲剂都是易混

合和可溶解的，最好选择与最终梯度条件相似的洗针液。

推荐使用的洗针液：80%甲醇/20%水

色谱条件洗针液

缓冲水溶液，反相80%有机相/20%水

非水溶液，反相100%甲醇

正相流动相

GPC流动相

离子交换水

清洗柱塞密封垫（sealwash）的溶液

含5%~10%甲醇的超纯水（一般放在弱洗溶液中）

注意：所有流动相和清洗液均需盛放于硼硅玻璃制作的高质量实验室玻璃器皿中，

混合均匀并在使用前要经过0.45µm的膜式过滤器的过滤，超声脱气1-2min。

2.开机及系统准备

2.1开机

先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器的电源。接通2695分离

单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始

化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，表示开机测试正常，之后启动

Emperor软件。

A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，

绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，将各泵头放到相应的溶剂瓶中备

用。

2.2干灌注(DryPrime)

当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，需进行干灌注。

操作步骤：

1.在Status(1)屏幕下，选择DirectFunction，光标选中“DryPrime”，按Enter。

2.显示DryPrime屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[OpenA]选择管路。

然后将针筒向外拉，抽出约5~10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成

后关闭Prime/Vent阀门。

3.光标选Duration，按数字键输入时间（一般为3分钟），按Continue。

4.重复上述步骤，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2.3湿灌注(WetPrime)

操作步骤：

1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”

字段，将欲WetPrime的溶剂通道输入100%。

2.按“DirectFunction”功能键，选择WetPrime，按Enter。

WetPrime的设定值，一般为FlowRate:5mL/min，Time:3.0min，然后按下

OK“”键，泵即开始进行WetPrime操作。

3.重复上述的步骤直到对所有溶剂的WetPrime执行完毕，观察压力是否稳定，

单管压力波动＜30psi，如不稳定可再次进行WetPrime。

注意：湿灌注时，如果用到缓冲盐要注意灌注顺序，建议有机相—纯水—缓冲盐，

并在平衡色谱柱时也要用10%有机相/90%纯水过度，严禁有机相与缓冲盐直接接

触。

2.4灌注柱塞密封清洗泵(PrimingthePlungerSealWashPump)

操作步骤：

1.回到Menu画面，选择Diag

2.确定SealWash的管路放在正确的位置。

3.按PrimeSealWash，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，

按Halt，停止。

4.按Close。

2.5灌注针头清洗泵(PrimetheNeed