蛋白质结晶学和X光衍射基础课件.ppt

蛋白质结晶学和X光衍射基础

;授课内容;授课目的;蛋白质三维结构测定方法;1895年德国物理学家伦琴发现X射线并因此获得1901年首届诺贝尔物理学奖，X射线历经110年跨越3个世纪，由于众多学者在探索X射线性质、应用、仪器等方面的创新性研究，先后有29位物理学家、晶体学家、化学家、分子生物学家等分别获得了物理（7项）、化学（9项）、生理学或医学（3项）总计19项诺贝尔奖。;1912年劳厄获得了X射线通过晶体后产生的衍射斑点图像（劳厄衍射图），证明了X射线的波动性及其波长范围。随后提出了表示原子排列周期与X射线波长间关系的著名的衍射方程（劳厄方程），并成功地解释了晶体衍射的实验结果。

英国物理学家布拉格父子、达尔文等人发展了X射线衍射理论，类比光学反射原理提出了表示晶体结构（晶面间距d）、X射线波长（λ）与衍射方位（?）间的关系的布拉格方程，提出了嵌镶晶体、完整晶体和包含有原子热运动诸因素的衍射强度公式，阐明了X射线通过晶体产生衍射的付里叶变换本质，获得了X射线的连续光谱与取决于阴极材料的特征光谱。;最终X射线衍射成为有机分子（特别是生物活性分子）立体结构测定的有力工具，为研究生理活性物质（药物分子）的立体结构、结构改造、结构预测、结构－功能关系为目标的有机晶体学科奠定了基础。

对于生物大分子的研究，始于30年代中期，贝纳尔和藿奇金开始用X射线衍射方法研究胃蛋白酶的晶体结构，但直到布拉格主持凯文迪实验室后，才使得这一工作取得突破，为创建分子生物学科奠定了基础。

1953年沃森和克里克根据X衍射实验数据建立了脱氧核糖核酸(DNA)的双螺旋结构，并因此获得1962年的诺贝尔生理学和医学奖。;肯德鲁和佩卢茨从30年代开始，应用X衍射方法研究肌红蛋白与血红蛋白的晶体结构，历经20多年的艰苦努力，在众多科学家的共同参与下，终于在1960年获得了这两个蛋白质的三维结构，并因此荣获1962年的诺贝尔化学奖。

在1957至1967年的10年中，相继用X衍射方法测定了溶菌酶、胰岛素、胰凝乳蛋白酶A、核糖核酸酶、核糖核酸酶S和羧肽酶的高分辨晶体结构???

戴森豪菲尔和胡贝尔、米海尔因测定紫色细菌光合作用中心的三维结构而获得1988年的诺贝尔化学奖，形成了新的蛋白质晶体学科与结构分子生物学科。;

X-射线

;X-射线;衍射的几何方程;X光衍射原理;Whatwecando？;克隆、表达、纯化

结晶

数据收集及处理

相角的测定

相角的改进（优化）

电子密度图的解释

修正

结构的描述和与功能关系的研究;Recombinantproteinover-expressionandpurification;SomeVectorsforE.coliExpressionSystem;ProteinExpressioninYeast;ProteinExpressioninInsectCells;TransientExpressionInMammalianCells;293EBNA1CellsWithGFPExpressingVector;RecombinantProteinsExpressionIn293EBNA1Cells;Cell-freeSystemforProteinProduction;Protein－ProteinComplexExpressionandPurification:

a.Proteinsexpressseparately;

b.Proteinsco-expressinonecell.

2.Protein-NucleicAcid：

a.Protein-DNAComplex；

b.Protein-RNAComplex.;Methodsforproductionofrecombinantproteincomplexesby

invivoreconstitutioninE.coli

1.Usecompatiblevectors,suchaspMR101(p15Aori)andpET15B(pBR322ori);

2.Useonevectorwithmorethanoneexpressioncassettes--polycistronic；

Benefitsofinvivoreconstitution(coexpression)

efficiency

oneroundofexpression

o