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昆虫分子生态学的
主要原理与研究方法;以昆虫为研究对象，研究昆虫及其周围环境相互关系的科学。它是昆虫学和生态学的分支学科。;昆虫分子生态学
昆虫生理生态学
昆虫种群生态学
昆虫群落生态学
生态系统生态学;一．主要原理;1.根本原理;2.主要理论;二．昆虫分子生态学的研究方法;1.分子标记的方法;表1昆虫分子生态学常用技术比较;RAPD;2.遗传变异的检测方法;三．昆虫分子生态学研究内容;四．昆虫分子生态学的应用;以利用ITS2序列分析赤眼蜂不同地理种群的遗传变异为例。;〔3〕PCR扩增及电泳
PCR反响在Hybaid热循环仪中进行，总反响体积50μL：40.2μL超纯水、5μL10×反响缓冲液〔100mmol/LTris-HCl,pH8.3,500mmol/LKCl,15mmol/LMgCl2〕，0.8μL10mmol/LdNTP混合液，25μmol/L正反引物各1.2μL，1μL模板DNA，0.6μLGIBCOBRLTaq酶〔5U/μL〕。扩增ITS2区段〔两端含局部5S和28S序列〕的引物为：TrichLSf-5′-TTCTCGCATCGATGAAGAACG-3′(forward)和TrichLSr-5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′(reverse)。PCR循环程序为：97℃变性1min，接着进行35个循环：95℃变性1min、50℃退火1min、72℃延伸2min，最后72℃延伸7min，置于4℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳别离，1×TAE缓冲液〔0.04mol/LTris-acetatepH8.0,0.002mol/LNa2EDTA〕100bpDNALadder相对分子质量标准参照物，电泳胶用溴化乙啶〔EB〕染色。;〔4〕克隆及测序
电泳后，将约564bp的PCR产物割下，分别置于1.5μL离心管，采用DNA快速纯化试剂盒〔Promega〕回收PCR产物，每样用25μLTEbuffer(10mmol/LTris-HCl,pH8.0,1mmol/LNa2EDTA)收集。连接反响使用5μL回收DNA，载体为Pgem-TVectorSystemⅠ，操作按用户指南。连接产物热激转化入感受态大肠杆菌细胞。阳性克隆鉴定时，先纯化质粒，再用内切酶BstZⅠ(Eco521)(Promega)进行酶切鉴定。酶切反响体积20μL，包括0.2-1.5μgDNA底物和内切酶，混合液37℃水浴3h，用1%琼脂糖胶检测消化反响。最后将每板1-3个阳性克隆测序〔ABIPRISM,Model377〕，采用PharmaciaDNA测序试剂盒双脱氧链终止法。;〔5〕地理种群序列间差异分析
首先采用软件DNAMANv.4.0进行手工比照，并在GenBank作BLAST搜索，然后用另一个软件MegAlign，基于Clustal算法对ITS2进行遗传分歧和相似???分析。Clustal方法通过将所有序列进行两两比照计算其距离，并将序列进行聚类。来自同一个体的阳性克隆用作单个个体内ITS2拷贝间序列差异分析。
〔6〕数据分析;谢谢！
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