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T/CATEAXXXX—2024

附录A

（规范性）

海藻酸含量的测定

A.1原理

含海藻酸样品在酸性条件下完全水解为甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖，经1-苯基-3-甲基-5-

吡唑啉酮（PMP）进行衍生化后，高效液相色谱分析，外标法定量。

A.2试剂和材料

除另有说明，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的规定。

A.2.1试剂

A.2.1.1乙腈(CH3CN)：色谱纯。

A.2.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

A.2.1.3磷酸二氢钾（KH2PO4）：优级纯。

A.2.1.4高氯酸（HClO4）。

A.2.1.5氢氧化钠（NaOH）。

A.2.1.6三氯甲烷（CHCl3）。

A.2.1.7冰乙酸（C2H4O2）。

A.2.1.81-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O，PMP，CAS号：89-25-8）：化学纯，纯度≥99.0%。

A.2.2标准品

A.2.2.1L-古罗糖醛酸单糖（C6H9O7Na，CAS号：15769-56-9），纯度≥97.0%。

A.2.2.2D-甘露糖醛酸单糖（C6H9O7Na，CAS号：6814-36-4），纯度≥97.0%。

A.2.3溶液配制

A.2.3.14mol/L氢氧化钠溶液：准确称取16g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL。

A.2.3.20.3mol/L氢氧化钠溶液：准确称取1.2g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL。

A.2.3.30.4mol/LPMP甲醇溶液：准确称取3.5gPMP，用甲醇溶解并定容至50mL，现用现配。

A.2.3.40.3mol/L醋酸溶液：准确量取1.7mL冰乙酸，加水溶解并定容至100mL。

A.2.3.50.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：准确称取6.8g磷酸二氢钾，加900mL水溶解，用NaOH溶

液调节pH为6.9，最后用水定容至1000mL，备用。

A.2.4标准溶液配制

A.2.4.1古罗糖醛酸标准储备液（5mg/mL）：精密称取古罗糖醛酸单糖标准品100mg置于20mL容

量瓶中加水溶解定容混匀。4℃密封保存，有效期7d。

A.2.4.2甘露糖醛酸标准储备液（5mg/mL）：精密称取甘露糖醛酸单糖标准品100mg置于20mL容

量瓶中加水溶解定容混匀。4℃密封保存，有效期7d。

A.2.5材料

A.2.5.1150mL磨口三角瓶。

A.2.5.2冷凝管。

A.2.5.3具塞试管：10mL聚丙烯材质。

A.2.5.4滤膜：有机相微孔滤膜，0.45μm。

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A.2.5.5一次性注射器：2mL。

A.2.5.6玻璃螺口消解管：10mL。

A.3仪器设备

A.3.1电子天平（精度：0.0001g或0.00001g）。

A.3.2高效液相色谱仪：配紫外检测器。

A.3.3恒温水浴锅。

A.3.4超声波发生器：20KHZ,100~500W。

A.3.5涡旋混合器。

A.3.6台式电子数显pH计。

A.4分析步骤

A.4.1水解

准确称取样品0.5g~1.0g（精确到0.0001g），置于150mL磨口三角瓶中，加入数粒玻璃珠，

然后加入高氯酸（A.2.1.4）5.0mL，超声水解20min。取出后冰水浴中加水50mL，安装冷凝水管，然

后于100℃～200℃的可调电热板上加热至微沸（玻璃珠周围明显出现汽泡）后回流2h。冷却后用4

mol/L的氢氧化钠溶液（A.2.3.1）中和（约14mL），调节pH值至7.5～8.5，加入0.05mol/L磷酸二氢

钾缓冲液（A.2.3.5）约2mL缓冲pH值，涡旋混匀，然后全部转移至1