一节细菌的生化试验.ppt

试管法将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1℃培养16～18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。01有溶血现象，为阳性，记+；02无溶血现象，为阴性，记-3、结果观察与记录此试验用于测定链球菌的致病性。阳性反应具有致病性。A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解,为阳性反应。原理：（二）链激酶试验2、试验方法吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液)，加入0.8mL生理盐水，混匀后，再加入待检菌36℃下培养18-24h肉汤培养物0.5mL和0.25％氯化钙0.25mL，混匀，放37℃水浴中，2min观察一次。待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。01如凝块全部溶化,为阳性+，02凝块24h仍不溶化,为阴性-3、结果观察与记录（三）卵磷脂酶试验原理：某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。卵黄平板法：A法：将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1℃培养3～6h，观察结果。122、试验方法菌落白色混浊环，先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1℃厌氧培养24～48h，观察结果。01在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。02两边均无不透明区，为阴性。03B法：菌落周围01无混浊白环02菌落周围03有混浊白环04乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制，05管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL，另一管加入生理盐水0.2mL作对照。在36℃水浴中，经2h、4h、8h、24h观察结果。010201（2）卵黄盐水法菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。01两边均无不透明区，为阴性。02管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。03两管无沉淀者，为阴性。043、结果观察与记录（四）血浆凝固酶试验原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。2、试验方法玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。血浆凝固酶试验生理盐水均匀混浊有凝块血浆（2）试管法取灭菌小试管3支，各加入血浆①－无菌水(1:1)0.5ml，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml；其余2支作对照管，1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9％氯化钠溶0.5ml作空白对照。将3管同时放37℃温箱或水浴中培养，每0.5h观察一次，4h内无凝固现象者，观察直至24小时。阳性反应阴性反应不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验明胶液化，为阳性，+。明胶凝固，为阴性，-。3、结果观察与记录简述靛基质试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项简述尿素酶试验的原理，写出其试验方法、结果的记录简述硫化氢试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试验管颜色变化过程和原理复习题01枸橼酸盐利用试验02丙二酸盐利用试验四、有机酸盐和铵盐的利用试验（一）枸橼酸盐利用试验原理：某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。2、试验方法挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培养基斜面上密集划线接种，在36±1℃培养1~4天，每天观察结果。斜面有菌苔