大批量细胞收获液澄清过滤.pdfVIP

使用的过滤系统受到越来越多的生物制品公司推崇，本文旨在介绍3M净化事业部

的新产品EZP™（EncapsulatedZetaplus™）使用过滤系统，该系统专门针对大批

量细胞收获液的澄清过滤而设计开发。同时，本文通过3个试验案例，阐述了EZP™的优

越性。

图1哺乳动物细胞收获液澄清工艺

●细胞收获液的澄清是生物制药工艺中下游纯化的第一步，通常使用离心机、过滤或

切向流技术（TangentialFlowFiltration，以下简称TFF），对适用于“大批量”、使

用的过滤技术，因其可以提高产品品质、简化操作，而越来越受到业内推崇。本文旨在

介绍3M过滤系统EZP™，应用于大批量细胞收获液的澄清过滤。

细胞收获液的澄清

澄清目的是有效分离收获液中的细胞、细胞碎片和其他胶状物质，为下游纯化（例如Protein

A层析柱）提供无杂质的料液。该工艺有很多应用技术，如图1所示，离心、切向流（TFF）、

絮凝以及过滤，通常采用多种技术组合的方式。如果只采用过滤技术，通常使用两

级过滤：第一级使用孔径较大的过滤介质，去除细胞或者细胞碎片；第二级使用孔径紧密的

过滤介质，去除胶体杂质。对于高密度细胞收获液，投加聚合树脂或壳聚糖的絮凝法，再配

合过滤是业内普遍采用的有效澄清工艺。

为降低生物负载，避免下游层析纯化柱过早，澄清工艺最后会配合0.45μm、0.2μm

的终端除菌过滤。工艺开发工程师会根据收获液的性质、分离的需要、有效性的验证以及操

作性等因素进行澄清技术的选择。

离心机用于澄清工艺已经比较成熟，但用于生物制药工艺则巨大。细胞收获液的杂

质粒径大小分布很广，均质后的收获液中，杂质粒径会更小而且含水量高，这些杂质与收获

因此，根据工艺开发工程师的经验，离心机适用于批量高于2000L的上游收获液的初步澄

清，对于下游浓缩纯化并不适用。另外，对于高细胞密度的上游收获液，例如细胞密度高于

1.5×10^8细胞/mL，单抗浓度高于25g/L，离心技术也。所以，通常在离心配

合使用过滤。

切向流（TFF）配合微滤膜过滤是目前生物制药领域被广泛采用的澄清工艺。切向流（TFF）

最大的优势在于，滤出液体积小、无杂质，可达到ProteinA层析柱的上柱要求。切向流通

常具有较高的初始通量，但是如果反向膜的没有控制好，就会很快形成滤饼，导致初始

条件速大大降低，并且随着过滤浓缩的进行，这种现象不可避免。TFF配备的流道的

直径和泵的处理粘度决定了可以处理的料液中悬浮固体的量。料液的高细胞密度会影响TFF

的浓缩比和渗透液的收率。另外，因膜上游的料液一直处于循环状态，剪切力会造成细胞破

裂。因此TFF并不是澄清过滤工艺的首选。

过滤系统

因其相对于离心机和切向流（TFF）的低成本和易验证的优势，过滤系统被广泛用于细

多数过滤介质都是由纤维素、助滤剂以及带电树脂制成，具有一定的润湿拉伸强度并且

表面带有正电核。过滤介质的原料是纸浆，工艺类似造纸，首先做成纸板，然后根据生

物制药的工艺要求，制成滤囊或者滤芯，安装在支架或滤筒中。

纤维素组成了滤芯中的网状结构，纤维之间的空隙用于捕捉料液中的颗粒，随着过滤的进行，

颗粒堆积在表面形成滤饼，会提高过滤的效率。同时随着滤饼越来越厚，也会降低过滤速度。

在纤维中加入硅藻土，可以提高在形成滤饼后的过滤速度。肉眼观察硅藻土是非常细小的颗

粒，在放大电镜下，可以看到它表明有很多亚微米的空隙，可以细小颗粒。

过滤介质的第三个组分是树脂，它有两个方面作用，一是粘结纤维，二是提供过滤介质

表面的正电荷。这些正电荷可以吸附带负电、比过滤孔径小很多的细胞碎片等杂质。过

滤滤芯通常做成模堆，放置在不锈钢滤筒中。这种过滤系统的容污量大大高于折叠膜和线绕

滤芯，可、吸附大量细胞和细胞碎片。

传统过滤系统

大批量细胞培养是生物