生化反应干扰实验.ppt

实验设计

被评价的方法和参考方法（或者其他被认定合格的比较方法）同时测定两组病人样本（测试组和对照组），如果测试组与对照组结果出现有意义的偏倚，存在干扰。参考方法或比较方法对干扰物有低敏感性。第60页,共81页，星期六，2024年，5月测试标本选择原则：疾病（例如，来自心脏病、肝病或肾病病人的标本）；药物（例如，使用过某种想了解的药物的病人标本）；其他不正常组分（例如，具有不正常胆红素、脂质、血红蛋白或蛋白的标本）。第61页,共81页，星期六，2024年，5月对照标本

选择原则：没有使用目标药物；潜在干扰物质在正常浓度范围内；相同或者相似诊断；分析物分布状态与测试标本相似；对照样本必须包括在每一分析批内。第62页,共81页，星期六，2024年，5月实验程序1.计算测试标本和对照标本数，取决于：两种方法精密度；干扰效应的大小；规定的假设检验水准。2.挑选测试组和对照组标本；3.选择合适的参考方法或者效果较好的比较方法；第63页,共81页，星期六，2024年，5月4.在尽可能短的时间内（通常在两个小时内），用两种方法重复测定每个样本。5.如果观察到偏倚存在，测定样本中药物或者其他潜在的干扰物质的浓度，如果可能的话，确定偏倚和干扰物浓度两者之间的关系。实验程序第64页,共81页，星期六，2024年，5月数据分析计算测试组和对照组平均值之间的差值，并与干扰标准进行比较，然后确定干扰能否被排除或者需要进一步的研究。第65页,共81页，星期六，2024年，5月1.与比较方法结果作偏倚图计算重复测定结果的均值；计算每个样本平均偏倚（测试方法结果减去比较方法结果）；作图：偏倚在垂直轴上，比较方法浓度在水平轴，测试和对照样本用不同的记号标识；通过线性回归分析计算每一组的Sy,x统计量（比较方法＝x），它可用于计算95％置信区间。数据分析第66页,共81页，星期六，2024年，5月2.可能干扰的偏倚评估：数据分析（A）相对于对照组的正偏倚(B)相对于对照组没有偏倚－成比例的方法偏倚(C)相对于对照组的负的偏倚(D)相对于对照组没有偏倚第67页,共81页，星期六，2024年，5月3.以潜在干扰物绘制偏倚曲线如果病人标本中可疑干扰物的浓度已知，可以判断它是否与获得的偏倚相关。数据分析一种与潜在干扰物浓度相关很好的干扰效应第68页,共81页，星期六，2024年，5月用病人样本评价干扰---局限性（1）对实验变异缺乏控制对照（2）本方法并不能确定原因与作用的关系，它只能说明偏倚与估计干扰物某水平的相对关系（3）如果标本不新鲜，将会失去某些易变组分（例如，乙酰乙酸、CO2等）第69页,共81页，星期六，2024年，5月用病人样本评价干扰—局限性4）病人通常用多种药物，因此，难于证实何种药物的干扰作用5)按疾病和用药对病人分类，不是不可能，至少对许多实验而言是非常困难的6)实验是一种机遇，成功取决于在检测的病人人群的标本中是否有此干扰存在第70页,共81页，星期六，2024年，5月7)很少有公认的参考方法。有的参考方法难以在常规实验室中使用。另外，参考方法可能也同样的被干扰。无论怎样，第二种方法对证实干扰物是有用的，这也是唯一的方法可检出药物代谢物干扰作用，它也可肯定在真实标本中有干扰的方法。用病人样本评价干扰---局限性第71页,共81页，星期六，2024年，5月建立、确认和验证干扰声明EP7-A可被厂商用于验证和确认特异性，建立干扰声明，临床实验室也可用它检验厂商的声明以及确认方法的特异性是否满足医学要求。第72页,共81页，星期六，2024年，5月干扰声明对于商业方法来说，已知的干扰物质应在使用明书中阐述，实验证明没有干扰的物质也应该阐述，以便实验室能够验证某种方法对它所服务的病人群体的适应性第73页,共81页，星期六，2024年，5月干扰声明---举例11.干扰物系列浓度的结果按照EP7文件，对AST方法进行干扰评价。当下列这些物质添加到血清中时，在显示的浓度水平处产生干扰，偏倚超过10％考虑为干扰。测试物质AST25U/L的干扰浓度AST200U/L的干扰浓度注释血红蛋白250mg/dL325mg/dL溶血N-乙酰半胱氨酸150mg/ml300mg/ml静脉注射治疗剂量为180mg/ml第74页,共81页，星期六，2024年，5月干扰声明---举例22.胆红素方法－两个水平的干扰筛选