高效液相色谱基础知识(共46张PPT).pptx

高效液相色谱基础知识;;一、系统组成;

二、准备

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;四、参数设定

;对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的滤膜过滤。

3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；

用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱

3、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。

连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管

更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

4：用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。

更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

系统适用性实验：三个重要指标

方法：按A泵的[run]键，指示灯亮，梯度程序运行；

（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）

①用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值（r）：r=mr/Ar（其中mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。

系统适用性实验：三个重要指标

1、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。

2：检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。;五、更换流动相并排气泡

;六、平衡系统

;六、平衡系统

;六、平衡系统

;七、进样;八、谱图的判断及结果计算;八、谱图的判断及结果计算;八、谱图的判断及结果计算;九、清洗管路及进样口;九、清洗管路及进样口;【特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池，在分析完毕后，均应按（）充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇-水，充分冲洗。;谢谢大家！;第二节岛津LC-10AT型HPLC注意事项

;一、流动相;二、样品;三、色谱柱;三、色谱柱;四、操作过程;四、操作过程;四、操作过程;四、操作过程;四、操作过程;四、操作过程;自己总结的12条

注意事项;1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒??杂质和其他物质(使用或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

;3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

;;柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。

清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。

;9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

;11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

;谢谢大家！;第三节高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法;一、保留时间变化;二、保留时间缩短;三、保留时间延长;四?、出现肩峰或分叉;五、鬼峰;

六、基线噪声;七、峰拖尾