henAsCas12a表达及高效纯化方法的建立.docx

henAsCas12a表达及高效纯化方法的建立

摘要

CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌的一种获得性免疫防御系统，enAsCas12a属于第二类CRISPR/Cas系统中Ⅴ型的A亚型，可在crRNA引导下对靶DNA进行切割。目前，CRISPR-enAsCas12已被开发为体外诊断和基因编辑的有力工具酶。Cas蛋白作为一种大分子核酸结合蛋白，纯化制备难度较为困难，现阶段广泛采用的多步纯化策略耗时长、产量低、成本高。因此，开发新型亲和层析策略将为enCas12a系统的进一步开发奠定基础。

本研究建立了基于Cl7/Im7互作的enAsCas12亲和纯化方法。首先，利用大肠杆菌表达出e