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汇报人：文小库2024-12-19病理切片HE染色

目录CONTENTS病理切片HE染色概述病理切片制备技术HE染色操作流程常见问题及解决方案病理切片HE染色的质量控制病理切片HE染色的应用与展望

01病理切片HE染色概述

HE染色定义苏木精—伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining），简称HE染色法。染色原理苏木精染液为碱性，使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色定义与原理

将石蜡切片放入二甲苯中脱蜡，再经梯度酒精脱水。切片与脱蜡先用苏木精染色，再用伊红染色，期间需进行水洗和分化。染色用梯度酒精脱水，再用二甲苯透明，最后封片。脱水与封片染色过程中的关键步骤010203

染色效果评价标准染色清晰度细胞核与细胞质应清晰可辨，无模糊或重叠现象。染色对比度细胞核与细胞质之间的颜色对比应鲜明，易于区分。染色均匀性切片内各部分的染色程度应一致，无深浅不一的现象。细胞结构保存度染色后细胞结构应完整无损，无变形或破裂现象。

02病理切片制备技术

根据临床需求和实验室设备，选择适当大小的组织块。取材大小常用10%福尔马林固定液，保持组织形态和细胞内成分。固定方择病变组织或器官，确保组织代表性。取材部位根据组织类型和大小，调整固定时间以确保组织充分固定。固定时间取材与固定方法

通过梯度乙醇脱水，去除组织中的水分，防止切片时变形。脱水脱水、透明与浸蜡处理使用透明剂如二甲苯，使组织块透明，便于浸蜡。透明将透明后的组织块浸入石蜡中，使石蜡完全浸入组织内部。浸蜡根据组织类型和大小，调整浸蜡时间以确保组织充分浸蜡。浸蜡时间

切片厚度根据观察需求和染色方法，选择适当的切片厚度。切片方法使用切片机进行切片，注意切片方向和完整性。贴片将切好的组织切片粘贴在载玻片上，确保切片平整无气泡。烤片将贴好的切片置于烤片机上烘烤，使切片与载玻片紧密附着。切片与贴片技巧

03HE染色操作流程

将组织切片放置在载玻片上，并烤片使切片与玻片贴合。切片与烤片使用二甲苯脱去组织中的石蜡，然后经过梯度乙醇复水，使组织恢复原有的形态和结构。脱蜡与复水如需要进行抗原修复等特殊处理，则在此步骤进行。染色前处理染色前的准备工作010203

将切片放入苏木精染液中染色一定时间，使细胞核着色成紫蓝色。用盐酸酒精溶液分化，使细胞核着色更加清晰，并去除多余的染料。用氨水或碱性溶液使细胞核返蓝，增强染色效果。将切片放入伊红染液中染色一定时间，使细胞质和细胞外基质着色成红色或粉红色。HE染色步骤详解苏木精染色盐酸酒精分化氨水返蓝伊红染色

封片使用中性树胶或DPX等封片剂封固切片，以保护切片不受外界因素影响，便于长期保存和观察。洗涤用流水或蒸馏水洗涤切片，去除多余的染料和杂质。脱水与透明使用梯度乙醇和二甲苯进行脱水和透明处理，使切片与玻片贴合更加牢固。染色后的洗涤与封片

04常见问题及解决方案

切片过厚会导致染色不充分，容易脱落。切片过厚切片粘附不牢切片时操作不当切片与玻片粘附不牢，易脱落。如切割速度过快、角度不当等，容易损坏切片。切片脱落或损坏问题

染色时间过短会导致染色不充分，颜色过浅；染色时间过长则会导致颜色过深，甚至褪色。染色时间过短或过长染色液浓度过高或过低都会影响染色效果，应根据实际情况调整。染色液浓度不当染色液使用时间过长，染色效果会逐渐下降，应定期更换。染色液使用时间过长染色不均匀或褪色现象

染色背景过深可能是切片过程中有气体进入，可在制作切片时尽量避免气泡产生。切片表面有气泡切片出现裂缝可能是切片过薄或切片时操作不当，可在切片过程中加以注意，避免产生裂缝。可能是染色液浓度过高或染色时间过长，可尝试降低染色液浓度或缩短染色时间。其他常见问题及应对方法

05病理切片HE染色的质量控制

染色效果细胞形态细胞核应被染成清晰的蓝紫色，细胞质、肌纤维、胶原纤维等应被染成深浅不一的红色，且颜色鲜艳，对比度高。细胞形态应完整，轮廓清晰，无变形、断裂、模糊等现象。染色质量评估标准切片厚度切片厚度应适中，一般控制在4-6微米之间，过厚或过薄均会影响染色效果。染色均匀性染色应均匀，无明显深浅不一或漏染现象。

切片质量切片应平整、无皱褶、无刀痕，厚薄均匀，以保证染色效果。优化措施包括使用高质量的切片刀和熟练的切片技术。影响因素及优化措施01染液浓度染液浓度过高或过低都会影响染色效果。优化措施包括按照标准配方配制染液，并定期更换新液。02染色时间染色时间过长或过短都会影响染色效果。优化措施包括根据组织类型和厚度调整染色时间，并经常观察染色效果以进行调整。03温度和湿度染色时的温度和湿度也会影响染色效果。优化措施包括在适宜的温度和湿度下进行染色，并避免过度干燥或潮湿。04

质量控制流程的建立与实施前期准备