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古之立大事者,不惟有超世之才,亦必有坚忍不拔之志。——苏轼
PCR技术及其应用实例和前景
检验0905郭媛媛
PCR是我们研究分子生物学的重要方法和工具,随着医学科技
的不断发展,这种技术越来越被人们看重,越来越多的应用到
我们的科技研究之中,作为医学检验工作者,这种技术也是我
们必须掌握的从这篇文章中让我们了解一下它在实践之中的前景。
[1]
摘要:PCR(ploymersechainreaction)技术,即聚合酶链反应技术,又称基
因体外扩增技术或和核酸体外扩增技术,利用两种与相反链杂交并利用附着于目
标DNA两端的寡核苷酸引物在高温(95°C)使目标DNA片断的DNA双链变性,分
解为单链,在较低温度(37-63°C)与引物退火,然后变温到72°C左右。在耐高
温DNA聚合物酶的作用下引物被沿样板DNA单链延伸合成互补链,然后有变性→
退火→延伸反复进行。引物大大过量,dNTP过量,酶在高温中是较稳定的,这
样经过几十个循环,目标DNA片断就按2的n次方递增,用此法可以从mRNA中,
cDNA库中扩出目标基因。总之,生物体内核酸的复制是半保留复制,PCR技术就
是在体外对此进行复制模拟。
关键词:PCR技术;DNA;应用;工程效益扩大
1引言
人类利用微生物的实践具有悠久的历史,公元前,人类就已经利用天然的微
生物(酶)生产奶酪和酒。进入工业革命时代,人们开始对天然微生物进行筛选
和诱变,生产某些简单的代谢产物,氨基酸,维生素和抗生素。
20世纪60年代至今,随着人类虽微生物认识的加深,DNA重组技术的出现,
发酵技术的提高:更多的微生物可产生各种各样的抗生素,应用于医学微生物学
(MedicalMicrobiology)中;更多微生物被发现可产生促生物质,有利于人和动
植物的生长,对农业科学(Agriculture)有着极重要的支持;还有些微生物的代
谢产物是重要的化工原料,加速了化工产业(ChemicalIndustry)的完善;再有
些微生物被广泛应用于法医鉴定(Forenic)、医学(MedicalScience)、环境监测
(EnvironmentSupervise)分子克隆(MemberClone)、序列分析(Alignment
Analysis)、考古研究(ArchaeologySearch)等重要学科,具有广泛的应用前景,
古之立大事者,不惟有超世之才,亦必有坚忍不拔之志。——苏轼
这就是我要介绍的PCR技术。
2PCR技术原理
[2]
下面我通过摘录了一个实验,来介绍一下PCR技术的过程及其原理(至于
它详细的实验过程和方法详见参考文献)。.
在94°C高温下双链变性,分离出DNA单链的模板,然后降温(55°C),然
添加的与DNA单链配对,紧接着温度升高(72°C),在DNA聚合酶的作用下,脱
氧核苷三磷酸开始渗入,并从引物的结合端开始,按5ˊ-3ˊ方向延伸,合成出
新生的DNA互补链,这一过程称为一循环,然后重复该循环,模板DNA被大量复
制。
在此,我要特别强调几点注意事项
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