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海纳百川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚。——林则徐

腺病毒的一些常见问题及解答整理自丁香园

汇总了腺病毒的一些常见问题及解答!

1.目前,对于基因治疗的载体选择,很难有一个统一的结论,文章也很

多,我将在如下给出。?本人认为,无论选择哪种载体,关键在于此载体在

局部的表达效率。无论就是采用ＩNＶIVO或者ＥＸVIVO的方法,因

为我们最终的目的就是要在局部表达我的目的基因,并且使其具有一定

的作用。而对于载体的副作用,目前较为公认的就就是病毒载体转染效

率高,但副作用大;质粒载体毒性小,但转染效率比较低。

同时,对于目前所常用的一些带有报告基因的表达载体如BD公司

所开发的系列载体,pEGFＰ、ｐDsReｄ、pEＹＦＰ与pECFP等:

这些载体如果用于细胞水平的检测,也许会更加的方便、直观,但就

是,如果用于体内的基因治疗,那就不就是一个理想的载体了。而传统的

表达载体如IＮVITROGEN公司()的pCDNＡ载体系列,会更好一些。

同时,为了获得更加高效的表达,一些公司也开发出了具有信号肽的

表达载体,以增加外源基因的分泌表达。?

正如一个疾病的治疗一样,治疗的方法越多,就证明还没有一个最有

效地治疗手段。基因治疗的载体也就是同样,很难说哪个载体具有高转

染、高表达、低毒性的全部优点。

以上就是本人的一点愚见,还请各位同道指正。?

２、转染过小鼠肝癌细胞H２2,请赐教:用什么方法可以达到最佳

效果,脂质体、电转还就是重组病毒？如果用脂质体,哪家的最好?

Ｈ２２细胞为悬浮细胞,用病毒(逆转录病毒与腺病毒)最为理想,一

就是转染效率高,

二就是不用筛选直接用于实验。但逆转录病毒的转染效率并不能

达到100%,且影响因

素多,而腺病毒感染效率高,几乎可达１00%,但只能短期表达(7-1０

天),随着细?胞传代,外源基因会逐渐丢失。

当然,H2２也可用脂质体进行转染,筛选应在96孔板上进行,由于培

养液少、细胞

海纳百川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚。——林则徐

相对静止,两周后可见细胞克隆生长,在倒置显微镜下用吸管吸取克

隆,进行扩大?培养。

3、重组腺病毒作基因治疗,因为不就是很了解,用ＡdEaｓy系统可

以不?具体的

实验步骤就是来自什么地方？主要细胞及试剂的来源？

、BIOgenｅ公司有整个系统,从质粒到细胞都有,我AｄEａsy的基

本原理请参阅文献

Ｐroc、Naｔl、Acad、Sci、ＵSＡVol、95、pp、２５０9-2５1

４,March1９98?

4、以腺病毒为载体做肿瘤细胞的基因转染,查文献,病毒滴度测定

用噬斑法,但所用细胞不统一,就是否有统一规定？就用肿瘤细胞来测行

不??只有能反式提供Ｅ1的细胞才能用来测腺病毒滴度,一般用Ｈ

EK293细胞,用肿瘤细胞肯定不能形成噬斑。

1)腺病毒E1区有转化细胞能力,出于安全性的考虑,也就是为了增

加载体的包装容量,现在通行的腺病毒载体就是E1区缺失的。?２)由于

E1区就是复制必需区,所以需要包装细胞系反式提供Ｅ１蛋白,这种细胞

系最常见的就就是29