大肠杆菌O157：H7实验诊断研究进展 .PPTVIP

大肠杆菌O157:H7实验

诊断研究进展;大肠杆菌O157:H7感染临床表现;大肠杆菌O157:H7传染源和传播途经

;一、细菌培养与鉴定;

;2．免疫磁珠分离法

;;;3．生化反应

;二．血清学检测

;1．玻片凝集试验

;2.胶体金免疫技术;胶体金免疫层析试验时以硝酸纤维膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一样。

;中国预防医学科学院微生物研究所利用胶体金技术、双抗体夹心法和显色反应等特点，研制了大肠杆菌O157:H7病原体快检金卡，通用于定性检测粪便、食品、水等样品中的O157:H7大肠杆菌。显色程度与样品中细菌含量成正比，最低测菌量为少于100个菌细胞，主要特点是敏感性高，可用于待检样品初筛，阳性样品可进行细菌分离，减少工作量。

;3.ELISA;Padhye等用单克隆抗体进行直接ELISA反应检测O157:H7,除O26：H11外，未发现与沙门氏菌、结肠炎耶氏森菌、志贺氏菌和肺炎克雷伯民菌等有交叉反应。单克隆抗体用于检测大肠杆菌O157:H7有明显特异性，可作为一种免疫试剂用于临床和食物标本的快速检测。Clark等近一步对单克隆抗体的研究发现,此种单克隆抗体识别的物质是LPS,这种LPS抗原决定簇用全细胞ELISA同样可以在其它血清型大肠杆菌和产生或不产生Vero毒素的大肠杆菌中检测到,而且易受到胆盐、吖啶黄和温度的影响,但可以通过结合免疫捕获的修饰方案来提高ELISA的特异性。

;4．免疫荧光技术

;固相荧光毛细管免疫分析

此方法高度敏感，具有快速、试剂用量少、易于操作等优点。Czajlu等用热杀死的O157:H7菌包被玻璃毛细管作固形支持物。

样品中加入结合了生物素的O157:H7多克隆抗体,作用一段时间,然后将此样品/抗体混合物与标记了Cy5(一种荧光花青染料)的亲和素加入到毛细管,孵育2min,冲洗、吹干,由激光传感器系统发射650nm波长激发光激发花青染料,之后用光学传感器系统测定荧光发射密度。

;;5．胶乳凝集

;6．间接血凝分析(IEHA)

;7.全自动抗原抗体检测系统

;8.免疫印记法;;二．分子生物学检测;1．DNA探针;2.PCR技术;PCR技术扩增体系的基本成分;

PCR技术循环参数;循环参数;循环参数;循环参数;循环参数;PCR扩增产物的检测方法

;PCR技术类型

;PCR技术在大肠杆菌O157:H7检测中的应用;PCR技术在大肠杆菌O157:H7检测中的应用;PCR技术在大肠杆菌O157:H7检测中的应用;4.23SrRNA在大肠杆菌O157:H7分型、检测中的应用;;;;大肠杆菌O157:H7实验室诊断依据;小结