DB12T 506-2014 大豆转基因成分筛查方法　.docxVIP

ICS65.020.01B04

DB12

天津市地方标准

DB12/T506—2014

大豆转基因成分筛查方法

Screeningmethodforgeneticallymodifiedsoybean

2014-04-22发布2014-07-20实施

天津市质量技术监督局发布

I

DB12/T506—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由天津市质量技术监督局提出。

本标准起草单位：天津市东丽区产品质量监督检验所、天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：黄凤军、陈杰、朱珠、李建、马强、赵新、龙起成、陈慧。

本标准2014年04月首次发布。

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DB12/T506—2014

大豆转基因成分筛查方法

1范围

本标准规定了大豆中转基因成分定性PCR筛查的术语和定义、检测方法、结果分析与表述。

本标准适用于大豆及其制品中Lectin内标准基因、CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4-epsps基因、Bt基因和bar/pat基因的定性PCR筛查检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样

农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

Lectin基因Lectingene编码大豆凝集素的基因。

3.2

CaMV35S启动子35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus（CaMV）

来自花椰菜花叶病毒的35S启动子。3.3

NOS终止子terminatorofnopalinesynthase（NOS）gene

来自胭脂碱合成酶基因NOS的终止子。3.4

CP4-epsps基因5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthasegenederivedfromAgrobacterium

sp.CP-4。

来源于土壤农杆菌株系（Agrobacteriumsp.）CP4株系一段可编码5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸

合酶的基因。3.5

Bt基因Bt（Bacillusthuringiensis）gene

来源与苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，简称Bt），可表达一种杀虫晶体蛋白的基因，常见的Bt基因有cry1Ac基因、cry1Ab基因、cry1Ab/cry1Ac融合基因。

3.6

bar/pat基因bialaphosresistancegene/phosphinothricinacetyltransferasegene

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DB12/T506—2014

bar基因来源于土壤吸水链霉菌（Streptomyceshygroscopicus），pat基因来源于绿产色链霉菌（Streptomycesviridochromogens），均编码膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinthricinacetyltransferase，PAT），该酶具有对除草剂草丁膦（glufosinate）的耐受性。bar基因和pat基因具有较高的同源性。

4检测方法

4.1试剂和材料

4.1.1实验用水为重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。

4.1.2琼脂糖。

4.1.310g/L溴化乙锭溶液：称取1.0g溴化乙锭（EB），溶于100mL水中，避光保存。注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。

4.1.410mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠（NaOH），溶解后再加水定容到200mL。

4.1.5500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（pH8.0）：称取18.6g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2），加入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液（4.1.4），加热至完全溶解后，冷却至