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志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
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1目的
规范LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）的检验工作，指导检
验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测，保证检验结果的质量。
2范围
本规程适用于LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）
3试剂
中山大学达安基因公司乙肝病毒(HBV)核酸扩增荧光检测试剂盒
4仪器
RocheLightCycler荧光PCR检测仪
高速台式冷冻离心机
微量加样器（覆盖1-1000μl）
5样品处理
样品处理按《PCR实验室标本处理规程》进行收集和处理，具体操作见本规程附录1和
附录2。
6测定
6.1PCR扩增
6.1.1打开稳压器电源，再打开计算机电源。
6.1.2打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.1.3将循环条件设定为：
程序循环温度保持时间
11次93℃2分钟
93℃5秒
240次
57℃45秒
31次40℃0秒
6.1.4检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。
6.1.5将待反应的PCR反应管放入扩增仪中，并根据实际情况和仪器操作规程在程序中定好
反应孔位置。
精品
志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
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6.1.6关闭扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
精品
志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
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6.1.7扩增结束后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。
6.2产物分析
6.2.1条件设置：反应结束后自动保存检测数据文件，调整荧光数值为F/F。点击
12
Quantification读取结果。
6.2.2基线的确定：取3～8个循环的荧光信号。
6.2.3噪声容限（阈值）：调节在阴性质控品以上，要求在Step3：Analysis下相关性r值
＜-0.97，接近-1.0。
6.2.4对照标准：保证阴性质控品的Ct值不出现任何数值（默认为40）。
6.2.5最后记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（M），关闭计算机。
7结果判断
7.1如果Ct值＝40，则实验样品的U
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