实验三-水及食品中微生物的检测.doc

实验三水及食品中微生物的检测

生物11赵晓云34号

食品微生物检验方法为食品监测必不可少的重要组成部分。它不仅是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品能否食用的科学依据之一。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生环境,能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据,提供传染病和人类，动物和食物中毒的防治措施。食品微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。

大肠菌群是指在37℃条件下24h内能够发酵乳糖产酸产气的无芽孢革兰阴性杆菌，主要包括肠杆菌科的4个属即埃希氏菌属(Escherichia)、枸橼酸杆菌属(Citrobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)和肠杆菌属(Enterobacter)的细菌。[1]该类细菌主要来源于人和温血动物的粪便，故将大肠菌群作为食品被人和温血动物粪便污染的指示菌来评价食品的卫生质量。食品中大肠菌群值的高低，表明该食品被粪便污染的程度，也反映对人体健康危害性的大小。因此大肠菌群数常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发流行，病情严重者，可危及生命。

1材料与仪器

1.1材料

样品：湖水、黄酒。

1.2培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、伊红美蓝固体培养基、乳糖发酵培养基。

1.2.1肉膏蛋白胨琼脂培养基

牛肉膏0.5g、蛋白胨1.0g、NaCl0.5g、水100ml、pH7.2、0.10Mpa灭菌20min。如配制固体培养基需加琼脂1.5%~2%；如配制半固体培养基则加琼脂0.7%~0.8%。

1.2.2乳糖胆盐发酵培养基(单料)

蛋白胨20g、乳糖10g、猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g、0.04%溴甲酚紫水溶液25ml、蒸馏水1000ml、pH7.4。配制方法如下：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每10ml，并倒置放入杜氏小管(注意排净小管内气泡)，115℃

1.2.3乳糖发酵培养基

蛋白胨20g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25ml、蒸馏水1000ml、pH7.4。配制时将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并倒置放入杜氏小管(注意排净小管内气泡)，115℃

1.2.4伊红美蓝固体培养基

伊红美蓝固体培养基是一种鉴别培养基，常用于食品及饮用水的微生物学检验，培养基中的伊红为酸性燃料，美蓝则为碱性染料，当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生产紫黑色化合物。在此培养基上大肠杆菌生长形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落，而产气杆菌则形成棕色大菌落，不能发酵乳糖的细菌产碱性物质较多，带负电荷，与美蓝结合形成兰色菌落。

其配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、20%乳糖溶液20ml、2%伊红溶液20ml、0.5%美蓝溶液10ml、水1000ml、琼脂20g、pH7.6。配制时将牛肉膏、蛋白胨、NaCl加入水中溶解，调pH为7.6，加琼脂、融化、分装、灭菌。再以无菌操作加入预先0.075MPa灭菌20min的20%乳糖溶液20ml、2%伊红溶液20ml、0.5%美蓝溶液10ml。当培养基冷却到50℃

1.3实验仪器

显微镜、培养箱、水浴锅、培养皿、吸管、接种环、试管、杜氏小管、涂布器、酒精灯、试管架等。

实验方法

2.1细菌总数的测定

2.1.1采样

瓶装发酵酒的取样方法：用点燃的酒精棉球灼烧瓶口灭菌，用石炭酸纱布盖好，再用灭菌开瓶器将盖启开，含有二氧化碳的酒类可倒入500ml灭菌磨口瓶中，口勿盖紧，覆盖一灭菌纱布，轻轻振荡，待气体全部逸出后，进行检验。

水样的采取方法：自来水应先将自来水龙头用火焰灼烧3min，再打开水龙头，使水自流5min，用无菌三角瓶接取水样，塞上塞子备用。池水、河水或湖水应取距水面10~15cm的深层水样，将无菌带玻璃塞的广口瓶浸入水中，盛满后将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检验，否则必须放入冰箱中保存。

2.1.2检样稀释(无菌操作)

将被检样25g(或25ml或1ml)剪碎，放入含有225ml(或9毫升)无菌生理盐水(或无菌水)的无菌三角瓶(瓶内放置适当数量的玻璃珠)或无菌研钵内，经充分振荡或研磨，制成10-1稀释液。用1ml吸管吸取10-1稀释液1ml，沿管臂慢慢注入含有9ml无菌生理盐水或无菌水的试管内，制成10-2的稀释液，同法，直到用最后稀释度的菌液做倾注法平皿计数时