DB15T 3796-2024葡萄组培脱毒育苗技术规程.docx

ICS65.020.01CCSB61

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3796—2024

葡萄组培脱毒育苗技术规程

Technicalcodefortissuecultureanddetoxificationofgrapeseedling

2024-12-18发布2025-01-18实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古农业大学提出。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古电子信息职业技术学院、内蒙古量蕴农业发展有限公司、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古嘉仕农业科技发展有限公司、呼和浩特市果丰种养殖专业合作社。

本文件主要起草人：樊丽、王旭、李小燕、刘艳、谢岷、杨波、陈晓旭、李家锋、肖存海、陆明、张敏、李正男、孙平平、张磊、聂素平、刘刚、董莉洁。

葡萄组培脱毒育苗技术规程

1范围

本文件规定了葡萄组培育苗过程中的仪器准备、外植体选择、热处理、外植体消毒、茎尖剥离、初代培养、增殖培养、生根培养、病毒检测、炼苗移栽、苗木质量控制等内容。

本文件适用于葡萄组织培养脱毒育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T15981消毒器械灭菌效果评价方法NY469葡萄苗木

NY/T2377葡萄病毒检测技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

外植体explant

植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。

3.2

组培苗tissuecultureseedling

利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下，培育的完整植株。

3.3

脱毒苗virus-freeseedling

不带有葡萄上常见的或已经鉴定的病毒种类的葡萄组培苗。

4仪器准备

实验中所用的超净工作台、镊子、解剖刀、解剖针、培养皿、滤纸、培养基等器材均需灭菌。

5外植体选择

选择品种纯正、生长势强、无病虫害的葡萄母株，采集母株上带有腋芽的嫩茎3cm～5cm茎段作为外植体，采样最佳时间为上午10时以前。

6热处理

采集的外植体插在装有营养液的容器中，先置于37℃条件下培养14h/d，然后25℃条件下培养10h/d，培养20d～30d。

7外植体消毒

将外植体去除叶片和叶柄，剪成长度3cm左右的茎段。茎段用自来水冲洗15min后，转入超净工作台，用75%酒精浸泡30s，再用无菌水冲洗3遍，然后用10%次氯酸钠溶液或0.1%升汞溶液浸泡8min～10min（期间不断摇晃瓶子，使消毒液和茎段充分接触），最后用无菌蒸馏水冲洗5遍。消毒所用器械的灭菌按照GB/T15981的规定。

8茎尖剥离

将灭菌后的茎段在灭菌的滤纸上吸干水分，置于解剖镜下，进行茎尖剥离。剥离出的茎尖大小为0.3mm～0.5mm。将剥离的茎尖快速接种于灭菌的初代培养基上。

9初代培养

9.1初代培养基

基本培养基为MS培养基，添加1.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.05mg/Lα-萘乙酸，20g/L～30g/L蔗糖，5g/L～7g/L琼脂粉，pH调至5.5～6.0。

9.2培养条件

接种瓶苗置于温度20℃~25℃,湿度60%～80%，光照强度1500lx～2000lx，8h光照，16h黑暗。

10增殖培养

10.1培养时间

在培养50d～60d后，取高度为1cm左右的葡萄新芽，将其转接到增殖培养基上。10.2增殖培养基

基本培养基为MS培养基，添加1.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.1mg/Lα-萘乙酸，2.0mg/LPVP，20g/L～30g/L蔗糖，5g/L～7g/L琼脂粉，pH调至5.5～6.0。

10.3培养条件

接种瓶苗置于温度20℃~25℃,湿度60%～80%，光照强度2000lx～2500lx，12h光照，12h黑暗。

11生根培养

11.1培养时间

当继代培养的组培苗高约2cm时，将其转接到生根培养