基因重组与基因工程.ppt

命名：HindIII属种株同一株具不同特异性酶分类：I、II、III类，常用II类异源同功酶：识别及切割位点相同同尾酶：产生相同的粘性末端BamHI:G↓GATCCSau3AI:↓GATC限制性核酸内切酶经反转录合成的、与RNA互补的单链DNA。cDNA：complementaryDNA基因组DNA：代表一个细胞或生物体整套遗传信息的所有DNA序列。目的基因基因载体克隆载体（cloningvector)携带目的基因、并实现目的基因的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。可充当克隆载体的DNA分子有：质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA常用的为SV40，通过感染方式将其DNA送入哺乳动物细胞中进行增殖。目前应用相对较少。载体具备条件自主稳定复制多克隆位点遗传标记插入容量大分子量小，拷贝多安全载体的分类按来源：质粒、噬菌体、病毒按产物：克隆载体、表达载体按宿主细胞：原核细胞载体、真核细胞载体供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具载体(vector)接合作用的典型的例子是细菌所含的一种质粒DNA——F因子，该因子含细菌性鞭毛蛋白编码基因，当F+细菌与F-细菌接触时，性鞭毛连接就会在两细胞间形成，F因子被酶切成单链并通过性鞭毛连接桥向F-细胞转移，从而使F-细菌转变为F+细菌。由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。将质粒DNA或以其为载体构建的重组子导入细菌的过程。1943年，Avery将有毒型肺炎双球菌DNA与无毒型肺炎双球菌一起培养，结果使无毒型肺炎双球菌转变为有毒型肺炎双球菌。其原因就是有毒型肺炎双球菌DNA进入无毒型肺炎双球菌中，引起其遗传性状改变。外来DNA侵入宿主细胞，并与宿主细胞DNA进行重组，成为宿主细胞DNA的一部分，这一过程称为整合。整合后的外来DNA仍然可随染色体DNA一起复制，并在适当的条件下进行表达，但也可在相当长的一段时间内不表达。整合在宿主细胞染色体DNA中的外来DNA，可以被切离出来，同时也可带走一部分的宿主DNA，这一过程称为转导(transduction)。来源于宿主DNA的基因称为转导基因。噬菌体感染宿主细胞后出现的溶菌生长途径和溶源菌途径就是典型的整合和转导的例子。噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。转染是转化的一种特殊形式。由transformation（转化）和infection（感染）两词构成。原指将噬菌体、病毒或以其为载体构建的重组子导入受体细胞的过程。将任何类型DNA转移至动物细胞内的过程均可叫转染。转座又称为转位Diagramofasimplecloningvectorderived?

fromaplasmid,acircular,double-stranded?

DNAmoleculethatcanreplicatewithinan

E.colicell.基因重组与基因工程

GeneticRecombinationGeneticEngineering李凌基因研究的三步曲一、20世纪50年代以前：染色体遗传学阶段二、20世经50年代—70年代：基因的分子生物学阶段三、20世经70年代至今：DNA重组工程学的发展，基因研究走向反向生物学阶段基本概念接合作用(conjugation)转化(transformation)及转导(transduction)转座(transposition)基因重组第一节自然界的基因转移与重组01重组DNA技术相关概念重组DNA技术基本原理重组DNA技术与医学的关系第二节重组DNA技术02基因重组与基因工程接合作用：当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA就可以从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的方式。接合作用(conjugation)二、转化(transformation)转化：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。转导：当病毒从被感染的供体细胞释放出来，再次感染另一受体细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用转导(transduction)转染是转化的一种特殊形式。由transformation