仪器教学：从基因组到蛋白质组.pptVIP

3、各类层析分离技术蛋白质分析鉴定的基本要求（一〕检查指标分析方法鉴定标准分子量SDS－PAGE电泳银染色一条带符合设计要求指标等电点等电聚焦电泳电泳银染色一条带，扫描95％以上浓度紫外分光光度法浓度(mg/ml)＝1.45OD280-0.74OD260纯度HPLC（或FPLC）层析一个峰（95％）WesternBlot有一条活性蛋白带蛋白质分析鉴定的基本要求（二）检查指标分析方法鉴定指标生物学活性细胞学实验符合国际规定的比活性和动物实验特定生物学检测指标结构分析氨基酸组成分析各种氨基酸组分比例符合预计标准氨基酸序列分析N－末端15个氨基酸符合要求肽谱图符合定点降解微量测序双向电泳技术蛋白质的氨基酸组成分析肽谱分析蛋白质的氨基酸序列分析（二）蛋白质组研究的基础：2蛋白质的氨基酸组成分析3蛋白质的氨基酸序列分析1双向电泳技术5微量测序4肽谱分析（二）蛋白质组研究的基础蛋白质组学研究的基本过程样品2-DPAGE成像分析蛋白质胶上酶解或膜转移等方法提取蛋白质或多肽混合物质谱测定肽质量及部分序列Edman降解N-terminal序列Databasesearching鉴定蛋白质双向凝胶电泳的基本原理是蛋白质首先根据其等电点在pH梯度胶中等电聚焦，然后按照它们的分子量大小进行SDS－PAGE第二次电泳分离。01蛋白质组研究通常需要对双向电泳分离的蛋白质进行鉴定。一种细胞或组织的蛋白质组双向电泳后可分离到几千甚至上万种蛋白质，一般对它们采取分级鉴定，即先用快速、低廉的方法，再采用耗时、耗资的方法去鉴定蛋白质。021、双向凝胶电泳（2－D）2、蛋白质的氨基酸组成分析氨基酸组成分析由于耗资低而常用于蛋白质鉴定。组成分析对杂质污染较敏感。通过组分分析，可得到某一种蛋白质中所含各种氨基酸的比例。3、蛋白质的氨基酸序列分析Edman降解法测定的蛋白质和多肽的氨基酸序列非常准确，但每次只能测定从N端起1－15个氨基酸。一个大的蛋白质分子往往含有多于100个以上的氨基酸。因此需要进一步进行肽谱分析。4、肽谱分析对于大于100个氨基酸的蛋白质需要化学方法（如CNBr）或生物学方法（酶解）将肽链断裂成不同短肽，测序后进行拼接而构成完整的序列。5、微量测序在Edman降解的基础上，目前已实现蛋白质微量测序的自动化。首先使凝胶分离的蛋白质直接转印到PVDF膜或玻璃纤维膜上，考马斯亮兰染色，甲醇－冰乙酸脱色，直接将印迹有蛋白质的PVDF斑点块或条带，剪切下来，置于蛋白质测序仪中，可用于极微量水平蛋白质的鉴定。仪器分析教学从基因组到蛋白质组复旦大学遗传所王洪海2009.4.10.人类基因组研究的意义人类基因组研究的现状蛋白质组研究的技术路线蛋白质组研究的意义和前景内容提要1986年美藉意大利科学家提出进行全基因分析，以寻找与正常人基因不同的肿瘤基因。1990年美国能源部和国立卫生研究院集中一批优秀的科学家准备投资30亿美元进行为期15年的人类基因组研究计划，对人类基因组作图和序列分析。希望在分子水平上破译人类所有的遗传信息，即测定大约30亿碱基对DNA序列和识别其中所有的基因（约10万,5万，4万，3万）。一.人类基因组研究的意义人类基因组研究的意义人类基因组研究计划，其意义和影响，远远超过曼哈顿计划（原子弹）和阿波罗计划（登月）。不仅美国、英国、法国、日本等发达国家参加了这项研究，就连亚洲、非洲和南美州一些发展中国家也纷纷加入这方面的研究。不仅政府部门投资进行这方面研究，而且一些大型药厂也对基因组计划极感兴趣，投入巨资。提前完成人基因组的测序，这样将为搞清肿瘤的发病机制，揭开人类衰老之谜，以及传染病的防治提供良好的对策。二.人类基因组研究现状我国在人类基因组研究方面取得了显著进展:湖南医科大学夏家辉等:家族性耳聋基因分析.NatureGenetics1998.20(4):370-393上海第二医科大学陈竺等：白血病相关基因分析上海肿瘤所顾健人等:肝癌相关基因分析中科院昆明生物所褚家佑等:中华民族基因关系分析PNAS