DB4409T 64-2024 益智组培技术规程.docxVIP

ICS65.020.20

CCSB61

DB4409

茂 名 市 地 方 标 准

DB4409/T64—2024

益智组培技术规程

TechnicalregulationontissuecultureofAlpiniaoxyphylla

2024-12-17发布 2024-12-25实施

茂名市市场监督管理局 发布

DB4409/T64—2024

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前??言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由茂名市市场监督管理局提出并归口。

本文件起草单位：茂名市林业科学研究所

本文件主要起草人：彭燕琼、陈龙舟、陈杏婷、王祥、李太钊、曾伟、卜蜜源、吴华青。

DB4409/T64—2024

DB4409/T64—2024

DB4409/T64—2024利用植物组织、器官或细胞等作为材料，通过组织培养方式生产获得的植株。

DB4409/T64—2024

利用植物组织、器官或细胞等作为材料，通过组织培养方式生产获得的植株。

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益智组培技术规程

范围

本文件规定了益智组培的无菌设施条件、组培、移植、苗木出圃、苗木建档等技术要求。本文件适用于茂名市益智的组培育苗。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T

2289

林木种苗生产经营档案

LY/T

2290

林木种苗标签

NY/T

1474

益智种苗

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

益智AlpiniaoxyphyllaMiq.

益智是姜科Zingiberaceae山姜属Alpinia多年生草本植物，为我国四大南药之一。

外植体explant

在植物组织培养过程中，接种在培养基上的无菌细胞、器官、组织等均称为外植体。

接种inoculation

将消毒后的外植体在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。

继代培养subculture

将培养物通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代培养的过程。

组培苗plantlet

组培的无菌设施条件

仪器设备

消毒设备

高压灭菌锅、医用小推车、专用托盘、微波炉、电热灭菌器等。

洗涤设备

晾瓶架、毛刷等。

称量设备

精度为0.1g的电子秤。

接种室设备

超净工作台，接种专用工作服，接种专用盘，解剖刀，口罩，鞋套，专用记号笔，脱脂棉/脱脂纱布，紫外灯，三角烧瓶，烧杯，量筒，组培瓶，组培盖，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸，组培筐等。

培养室设备

空调，高效节能培养架，光谱灯，温湿度计，程控定时器。

污染控制

污染控制的内容包括：

a）人员进入组培室前更换干净鞋子和衣服，通过风淋系统消毒后进入组培室；b）每次接种前用紫外灯照射接种室和培养基存放室30min；

接种前超净工作台的台面、四周、顶面及台面上所有物品用75%酒精喷雾一遍，小方巾擦拭一遍；

每接种一瓶母苗需更换接种工具，且手术刀、镊子等用230℃～250℃电热灭菌器灭菌1min以上；

接种碟子、手术刀、镊子等接种工具每7d用120℃～125℃高压灭菌25min一次；f）组培室每7d用消毒液拖地一遍，紫外灯照射30min一次。

组培

灭菌

培养基

培养基配制

培养基按各组织培养阶段培养基配方（见附录A）进行配制。

培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂后加热溶解，趁热分装于350mL组培瓶中，每瓶30mL，在高压灭菌锅中120℃～125℃灭菌20min。取出冷却后放置培养基存放室7d以上，确认无污染后再使用。

接种工具

长镊子、解剖刀、剪刀等接种所需的一切用具以及无菌水，与5.1.1.2的培养基一起在高压灭菌锅中120℃～125℃灭菌20min。

外植体

选择

采用块状茎芽做外植体，茎芽需饱满、健壮，无畸形、无病虫害、无严重机械损伤等。

消毒

于晴天挖取益智未展叶块茎茎芽，去土去根，在块茎茎芽苞片与姜块交界处切断，保湿带回实验室，置于饱和漂白粉溶液浸泡30min，无菌水洗净，转移至次氯酸钠溶液浸泡15min，无菌水漂洗4次以上，将漂洗干净的外植体进行第二次切割，剥离块茎茎芽外层苞片，切除接触次氯酸钠溶液的部分，从中轴纵切成两半，再用无菌滤纸吸干表面水分待用。

诱导

接种

将无菌外植体接种到诱导培养基，接种时芽朝上，每瓶接种2个～3个外植体。接种后