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生物技术综合实验报告(原生质体相关)--第1页
生物技术综合实验报告（第一部分）
实验一工作液的配制、培养基配制、器皿洗涤及灭菌
一、实验目的
掌握各种工作液配制方法；了解植物培养基的构成及配制方法；掌握高温高压灭菌的
方法。
二、原理
培养基是植物组织培养的基本条件，同时也是关键因素。
湿热条件(121℃的蒸汽，10分钟)能够有效地杀灭附着在玻璃器皿、器具以及溶液
和培养基中的微生物达到灭菌的目的。
三、器具和试剂
灭菌锅，天平，电炉，微波炉，三角瓶，封口膜，移液管，移液器，量筒，烧杯，
pH试纸，培养皿，滤纸，Parafilm封口膜。
琼脂，MS培养基大量元素，无菌水，葡萄糖，2,4-D，IBA，KT（激动素），1M
NaOH及HCl，卡那霉素，头孢霉素，乙酰丁香酮。
四、实验内容
PH调节剂的配制、培养基母液的配制、培养基的配制、各种相关物品的准备
（一）培养基的配制步骤
1、取个干净烧杯，加入1/3-2/3左右的蒸馏水，用移液管取所需的母液加入烧杯。
2、称取定量的蔗糖加入烧杯中并不断搅拌，直到完全溶解，定容。
3、用NaOH或者稀HCL调剂酸碱值。
4、称取定量琼脂糖加入烧杯中，加热煮沸搅拌，待琼脂完全溶解，分装。
5、高压灭菌（121℃,15min-20min)。
6、冷却，取出，备用。
（二）棉花无菌苗培养基的制备
1、取25mlMS大量元素母液，称取葡萄糖15g、于1升的烧杯中，定容后调pH
值为6.0，加入7.5g/l琼脂煮沸。
2、然后将其分装到100毫升的三角瓶中，每瓶40毫升。
3、用封口膜封口后在灭菌锅中灭菌15分钟。
4、灭菌后臵于水平的工作台上冷却即可。
要求：配制1L
（三）拟南芥无菌苗培养基的制备
1、拟南芥无菌苗培养基：1/2MS大量元素+蔗糖10g/L，PH值6.0；加入7.5g琼
脂高温高压灭菌。
2、0.1%琼脂糖：0.1g琼脂糖/100ml蒸馏水；无菌苗培养基和0.1%琼脂糖均121°
高压灭菌15分钟。
3、另准备20套9cm培养皿，灭菌。
要求：配制0.5L，装1瓶灭菌，灭菌后培养基倒皿。
五、注意事项
1、为了尽量减少人为的误差，必须严格按实验步骤进行操作，严格按照要求的量
来配制工作液、母液及培养基。
2、应当把培养基中的各种成分都写在纸上，加进去一个以后即划掉一个。
3、所有装着培养基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培养皿等都应当清楚地做上标记。
生物技术综合实验报告(原生质体相关)--第1页
生物技术综合实验报告(原生质体相关)--第2页
4、每小组的操作的具体事项请参照黑板上贴的任务分组。
5、爱护实验仪器及耗材，小心使用玻璃器皿，合理灭菌，因为灭菌耗时较长。
实验二无菌苗的制备
一、原理
化学灭菌：0.1%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分钟可以对棉花种子等外植体进行灭菌，
84消毒液（2%的次氯酸钠）浸泡3分钟可以对拟南芥等小种子外植体进行消毒。
物理消毒：紫外灯消毒、酒精灯火焰或高温烧灼5min左右可有效杀死镊子、剪刀
等不锈钢操作器具的菌类达到消毒的目的。
二、实验材料、器具和试剂
棉花品种YZ1;拟南芥col-0野生型灭菌
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