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1.2微生物的培养技术及应用1.2.1微生物的基本培养技术
无细胞结构原核细胞真核细胞微生物:真菌:酵母菌、毛霉等;原生生物:草履虫、变形虫等微生物的类群病毒:SARS病毒、新冠病毒等RNA病毒;噬菌体等DNA病毒细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌、根瘤菌、硝化细菌;放线菌、支原体、衣原体等难以用肉眼观察的微小生物的统称。本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。相关信息(P9)SARS冠状病毒新冠病毒酵母菌毛霉大肠杆菌乳酸杆菌
思考:在实验室中培养纯净的微生物,需要满足哪些条件?一、提供生长繁殖所需营养和环境条件二、防止杂菌污染配制培养基进行无菌操作
一、微生物的基本培养技术(一)培养基的配制1、概念:培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。用于培养、分离、鉴定、保存微生物或积累代谢物。(作用)2、类型:(1)按物理性质划分:固体培养基:液体培养基:半固体培养基:菌种保存、分离、鉴定、计数观察微生物的运动工业生产和连续扩大培养凝固剂(琼脂)多无
2、类型:(2)按功能划分:选择培养基:添加(或缺少)某种化学成分鉴别培养基:添加某种指示剂或化学药剂菌种的分离菌种的鉴别不加氮源的无氮培养基——分离固氮菌伊红美蓝培养基——鉴别大肠杆菌紫黑色,并带有金属光泽一、微生物的基本培养技术(一)培养基的配制
2、类型:(3)按化学成分分:天然培养基:合成培养基:化学成分不明确,用于工业生产化学成分明确,用于微生物的分类和鉴定牛肉膏蛋白胨/肉汤培养基(培养细菌)麦芽汁培养基(培养酵母菌)查氏培养基(培养霉菌)一、微生物的基本培养技术(一)培养基的配制
3、营养成分:培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g氮源和维生素NaCl5g无机盐H2O定容至1000mL氢元素、氧元素1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成(1)一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。(2)另外还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质(如生长因子)等的要求。乳酸杆菌——添加维生素;霉菌——调pH至酸性;细菌——调pH至中性或微碱性;厌氧微生物——提供无氧条件一、微生物的基本培养技术(一)培养基的配制
碳源
1)不同微生物所利用的碳源不同①异养型:②自养型:含碳有机物(有机碳)含碳无机物(无机碳)糖类(主要)、蛋白质、脂肪酸碳酸盐,碳酸氢盐,二氧化碳等3、营养成分(补充)①无机氮源:N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。氮源1)来源:
微生物碳源氮源能源蓝细菌硝化细菌根瘤菌大肠杆菌CO2NH4+、NO3-等光能CO2NH3NH3的氧化糖类等有机物N2有机物糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物1.自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于;自养型微生物所需的碳源来自碳源,异养型微生物所需的碳源来自碳源2.无机氮源不但能给自养型微生物提供,也能作为,3.含有C、H、O、N的有机物可作为微生物的碳源、氮源、能源;碳源氮源能源物质异养型无机有机学以致用
√
编号成分含量①粉状硫10g②(NH4)2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml2、右表是某微生物培养基成分,请据此回答:(1)右表培养基可培养的微生物类型是。自养型微生物(2)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于培养。(3)表中营养成分共有类。(4)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是。(5)用于菌种鉴定,应该增加的成分是。固氮微生物3调节pH琼脂(或凝固剂)水无机盐无机氮源
1、获得纯净微生物培养物的关键是:(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;
(2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;
(3)为避免周围微生物污染,实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近旁进行;
(4)避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。应该从哪些方面避免杂菌污染呢?一、微生物的基本培养技术(二)无菌技术防止杂菌污染
(二)无菌技术2、消毒与灭菌的含义(1)消毒:是指使用较为温和的物理、化学或生物方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。(2)灭菌:是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。芽孢:有
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