考向09 基因工程江苏高考生物之【考前押大题】.docx

考向09基因工程

1．（2023·江苏扬州·扬州中学校联考模拟预测）土壤盐渍化影响水稻生长发育，将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图，其中bar为抗除草剂基因，Tetr为四环素抗性基因，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，①~⑦表示操作过程。

限制酶

BamHⅠ

BclⅠ

SmaⅠ

Sau3AⅠ

识别位点及切割位点

-G↓GATCC-

-T↓GATCA-

-CCC↓GGG-

-↓GATC-

(1)OsMYB56基因游离的磷酸基团侧为__________（“5”或“3”）端，过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶催化__________键的形成，还需要添加引物，应选用引物组合__________。

①5-CTTGGATGAT-3????????②5-TAAGTTGTCT-3????????③5-TAGTAGGTTC-3

④5-TCTGTTGAAT-3????????⑤5-ATTCAACAGA-3????????⑥5-ATCATCCAAG-3

(2)根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是___________，其功能是___________。基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向___________（填“相同”或“相反”）。

(3)过程③应选用限制酶__________切割质粒，利用所选限制酶进行操作的优势是__________，切割后需要用___________进行连接才能获得重组质粒。

(4)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，④过程应在添加___________的选择培养基上培养。培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是___________。

2．（2023春·江苏南通·高三江苏省如皋中学统考阶段练习）人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一种单链RNA病毒，下图是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，下表是相关限制酶的识别序列及切割位点，请回答：

限制酶

BclⅠ

EcoRⅠ

XbaⅠ

Sau3AⅠ

BamHⅠ

识别序列及切割位点

T↓GATCA

G↓AATTC

T↓CTAGA

↓GATC

G↓GATCC

(1)HRSV的基因组为﹣RNA，入侵细胞后在______的催化下合成+RNA。

(2)过程②设计引物时在两种引物的5’端分别添加______酶的识别序列。过程③需要用______酶切割质粒A。

(3)过程④将质粒B导入大肠杆菌，有利于_____，需要用______处理大肠杆菌。

(4)为制备减毒突变株，科研人员将单个突变碱基引入HRSV基因组cDNA质粒克隆中，流程如下图。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰，通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。

①DpnI识别甲基化的GATC四个碱基序列，因此其能将______水解消化掉。在大肠杆菌细胞内完成缺刻修复需要______酶。

②已知质粒B为a个，经过程①扩增15个循环，需要突变引物______个，将过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制n轮，得到双链突变的DNA______个。

3．（2023·江苏南京·统考二模）烟草易受烟草花叶病毒（TMV）感染而大幅度减产。绞股蓝（一种植物）细胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV烟草。

(1)下表是相关研究中的一些步骤，请结合所学基因工程知识完成以下表格（在答题卡上的①~⑥处填写）

实验步骤

方法要点

从绞股蓝细胞中提取总RNA，通过逆转录过程获得DNA；再通过①__________

筛选合适的目的基因

技术扩增出大量目的基因片段

②__________

将目的基因插入Ti质粒

转化细胞

常用③__________方法将重组质粒导入受体细胞

④__________

在含有卡那霉素的培养基上培养受体细胞

获得再生植株

运用⑤__________技术培育

转基因植株分析

从分子水平与⑥__________水平，上对转基因植株进行检测与鉴定

(2)为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对绞股蓝油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向。

①利用PCR扩增LEA基因时，需要在引物的______________（填“3’端”或“5’端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶是____________。

②为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为_______扩增____________代后会得到等长的8条DNA片段。

③乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键