《免疫实验技术》课件.pptVIP

**************免疫细胞的来源与分离外周血从静脉血中分离出淋巴细胞和单核细胞是最常见的免疫细胞来源。骨髓骨髓是造血干细胞的主要来源,可分离出各种免疫细胞的前体细胞。淋巴组织从淋巴结、脾脏等淋巴器官中可分离出更为纯粹的免疫细胞。其他组织肺、肝、肠道等组织也是免疫细胞的重要来源之一。淋巴细胞分离方法1密度梯度离心利用淋巴细胞与其他血细胞的密度差异进行分离2负选亲和层析利用抗体去除非淋巴细胞，保留淋巴细胞3磁珠免疫分选利用特异性抗体修饰磁珠捕获目标细胞常用的淋巴细胞分离方法包括密度梯度离心法、负选亲和层析法和磁珠免疫分选法。这些方法利用淋巴细胞的特性,如密度、表面标志等,通过离心分离、免疫亲和结合等原理实现对淋巴细胞的快速纯化和富集。单核细胞分离方法1密度梯度离心法利用单核细胞与其他细胞的密度差,通过密度梯度离心可以分离富集单核细胞。2免疫亲和层析法使用针对单核细胞表面抗原的单克隆抗体,通过免疫亲和层析可以纯化单核细胞。3磁珠分选法利用针对单核细胞表面抗原的磁珠结合,通过磁场分选可以高纯度分离单核细胞。免疫细胞培养技术1细胞传代定期转瓶以保证细胞生长2培养基配制根据细胞类型选择合适培养基3无菌操作在无尘室中进行细胞培养4温度调控细胞培养需要精确的温度环境免疫细胞培养是研究免疫功能的基础。要保证细胞生长状态良好,需要合理调控细胞传代、培养基配制、无菌操作以及温度等因素。精细把握这些技术细节,才能获得高品质的免疫细胞,为后续实验奠定坚实基础。免疫细胞功能检测细胞激活检测通过检测免疫细胞表面标志和分泌因子,可以评估其激活状态和功能。细胞毒性分析检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力,反映其细胞毒性作用。细胞迁移评估观察免疫细胞在趋化因子刺激下的迁移能力,体现其运动性和趋化性。细胞黏附测定检测免疫细胞与靶细胞的粘附能力,反映其粘附分子表达和细胞间相互作用。细胞毒性实验样品制备首先需要准备好待测细胞和目标细胞,并采用合适的浓度和培养条件。细胞共培养将待测细胞和目标细胞共同培养一定时间,观察细胞特性的变化。指标检测通过CCK-8、乳酸脱氢酶等指标检测细胞活性和毒性效应。数据分析对实验结果进行分析,评估待测细胞的细胞毒性效应大小。细胞因子分泌测定1诱导通过不同刺激条件激发细胞分泌细胞因子2检测采用ELISA、Westernblot等方法定量分析细胞因子浓度3分析根据细胞因子水平变化评估免疫细胞功能细胞因子分泌检测是评估免疫细胞活性的重要手段。通过不同的刺激条件诱导细胞分泌特定的细胞因子,再采用高灵敏度的ELISA或Westernblot等技术定量分析细胞因子水平。从而可以反映免疫细胞的功能状态,为免疫调节研究提供重要依据。细胞表面标志检测1细胞分选利用特异性抗体标记细胞表面分子,通过细胞分选技术对目标细胞进行分离。2流式细胞术使用荧光标记的抗体检测细胞表面的各种分子,可以定量分析细胞的表型。3免疫组化将特异性抗体与染料结合,通过显微镜观察细胞表面分子的分布和表达情况。细胞内因子检测1内质网检测蛋白质的分泌和加工过程2线粒体测量能量代谢和氧化应激水平3细胞核分析基因表达和调控因子活性细胞内因子检测是评估免疫细胞功能状态的关键手段。通过检测线粒体、细胞核和内质网等细胞器中的关键分子,我们可以全面了解免疫细胞的代谢水平、信号传导和基因调控情况,从而评估其免疫活性和反应性。这有助于深入认知免疫细胞的复杂生物学过程。细胞周期检测细胞周期概述细胞周期由G1、S、G2和M四个阶段组成，每个阶段都有不同的特征和功能。细胞周期检测原理通过DNA含量分析、细胞表面标记等方法,可以准确判断细胞所处的周期阶段。细胞周期分析技术常见的技术包括流式细胞术、免疫荧光法、电泳法等,各有优缺点。细胞凋亡检测1核浓缩细胞凋亡初期会出现核浓缩和染色质凝集的特征性变化。2DNA断裂随后细胞DNA会被内源性核酶切割成小的片段，形成典型的DNA梯状图像。3细胞质膜损伤细胞质膜也会出现不同程度的破坏和变形。免疫细胞迁移实验1细胞培养在培养基中培养目标免疫细胞2制备细胞迁移板在板上制造单一空隙3细胞迁移观察细胞迁移填充空隙的情况4数据分析量化分析细胞迁移速度和范围免疫细胞迁移实验是评估免疫细胞功能的重要手段之一。该实验可以观察免疫细胞在体外条件下的迁移能力,包括迁移速度、方向性和迁移范围。这些指标可以反映免疫细胞的趋化性、运动性和趋化信号感受能力,从而评估其在免疫反应中的作用。免疫细胞黏附实验1细胞识别