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沃特世操作UPLC

目录CONTENTSUPLC技术概述样品前处理与进样色谱柱选择与使用流动相配制与优化仪器操作与数据分析应用实例与拓展应用

01UPLC技术概述

UPLC的原理与HPLC基本相同，都是利用样品中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离。但UPLC采用了更小粒径的填料（通常小于2μm），使得色谱柱的效能大大提高，同时采用了更高的压力（可达15000psi）来驱动流动相，从而实现了更高的分离度和更快的分析速度。UPLC（Ultra-PerformanceLiquidChromatography，超高效液相色谱）是一种基于传统高效液相色谱（HPLC）技术，通过采用更小粒径的色谱填料、更高压力的输液系统以及更优化的色谱柱设计，实现更高分离效能、更快分析速度和更低溶剂消耗的色谱分离技术。UPLC定义及原理分离度快速分析低溶剂消耗高灵敏度UPLC技术优势由于采用了更小粒径的填料，UPLC的色谱柱效能更高，能够实现更高的分离度，对于复杂样品的分析具有优势。UPLC采用了更高的压力和更优化的色谱柱设计，使得分析时间大大缩短，提高了分析效率。UPLC与质谱等检测器联用，可实现高灵敏度的检测，对于痕量组分的分析具有优势。UPLC在保持高分离度的同时，降低了溶剂消耗，更加环保和经济。

色谱柱0102030405包括高压输液泵、溶剂混合器、在线脱气器等，用于提供稳定、精确的流动相流速和组成。包括自动进样器和手动进样器，用于将样品注入色谱柱进行分离。包括紫外可见检测器、荧光检测器、质谱检测器等，用于对分离后的组分进行检测和定量。采用小粒径填料的色谱柱，具有高分离效能和快速分析的特点。用于采集、处理和分析色谱数据，提供定性和定量结果。沃特世UPLC系统组成进样系统输液系统数据处理系统检测系统

02样品前处理与进样

溶解与稀释过滤与离心衍生化样品前处理方法根据样品性质选择合适的溶剂进行溶解，并通过稀释调整样品浓度至仪器检测范围内。使用合适孔径的滤膜过滤样品，去除不溶性颗粒和杂质。对于含有悬浮物的样品，可进行离心处理以分离固体和液体。对于某些难以直接检测的化合物，可通过衍生化反应转化为易于检测的形式。

根据仪器要求和样品浓度选择合适的进样体积，确保峰形良好且不会过载色谱柱。进样体积清洗进样针气泡检查在每次进样前，使用合适的溶剂清洗进样针，避免残留物对后续样品的影响。在进样前检查进样针中是否有气泡，确保进样过程的准确性。030201进样技巧与注意事项

1234使用合格试剂和溶剂避免使用受污染的容器和工具定期清洗仪器合理安排样品顺序避免污染和交叉污染措施选择纯度高的试剂和溶剂，减少杂质对分析结果的影响。定期对仪器进行清洗和维护，确保仪器处于良好的工作状态。使用清洁的容器和工具进行样品处理和进样，避免交叉污染的发生。根据样品性质和浓度合理安排进样顺序，避免高浓度样品对后续低浓度样品的干扰。

03色谱柱选择与使用

反相色谱柱正相色谱柱离子交换色谱柱亲和色谱柱色谱柱类型及特点适用于极性化合物的分离，具有较低的极性，通常需要在较高温度下进行分离。适用于非极性至中等极性的化合物分离，具有较高的分离效能和广泛的应用范围。适用于具有特定生物活性的化合物分离，如蛋白质、抗体等，通过生物分子间的特异性相互作用实现分离。适用于离子型化合物的分离，通过离子交换作用实现分离。合物性质分离要求流动相组成仪器条件色谱柱选择依据根据待分离化合物的极性、溶解性、稳定性等性质选择合适的色谱柱类型。根据分离度、分辨率、峰形等要求选择合适的色谱柱规格和填料粒径。根据流动相的组成和pH值选择合适的色谱柱材质和封端方式。根据UPLC仪器的配置和性能选择合适的色谱柱长度、内径和填料粒径。

色谱柱安装流动相过滤色谱柱清洗色谱柱保存色谱柱使用注意事项确保色谱柱正确安装在UPLC系统中，避免产生死体积和泄漏现象。使用前应对流动相进行过滤，以去除杂质和颗粒物，避免对色谱柱造成损害。定期对色谱柱进行清洗和维护，以延长使用寿命和提高分离效果。长时间不使用时，应将色谱柱保存在适当的溶剂中，避免填料干燥和受损。

04流动相配制与优化

常用的有甲醇、乙腈等，用于调整流动相的极性，影响色谱峰的保留时间和分离效果。有机相一般为超纯水或加入一定比例的缓冲盐，用于提供离子强度和调节pH值。水相如离子对试剂、表面活性剂等，用于改善峰形、提高分离度或增加检测灵敏度。添加剂流动相组成及作用

使用高精度天平准确称量各组分，确保流动相组成的准确性。精确称量按照一定比例将有机相、水相和添加剂依次加入混合容器中，充分搅拌均匀。顺序混合使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤流动相，以去除杂质和气泡，保证色谱系统的稳定性和重现性。过滤脱气流动相配制方法

通过改变有机相的比例，可以调