专题十五 基因工程-2025届高三大二轮生物学 (新教材) .pdfVIP

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

微专题1基因工程

1·(2025·····)········(·1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接

酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切

割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。

下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()

A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA连接酶连接

B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接

C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接

D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接

解析：C酶3切割后得到的是平末端，应该用T4DNA连接酶连接，A不

符合题意；质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性

末端，二者不能连接，B不符合题意；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得

到黏性末端，用T4DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，

不飞则已，一飞冲天；不鸣则已，一鸣惊人。——《韩非子》

此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C符合题意；若用酶2和酶4切割质

粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少

标记基因，无法进行后续的筛选，D不符合题意。

2．(2023·广东卷，改编)种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟

南芥(2n＝10)进行诱变，筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，

发现野生型DA1基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，

据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。

回答下列问题：

(1)拟采用农杆菌转化法将野生型DA1基因转入突变体植株，若突变体表型确

由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与______植株的种子大小相近。

(2)用PCR反应扩增DA1基因，用限制性内切核酸酶对PCR产物和

____________进行切割，用DNA连接酶将两者连接。为确保插入的DA1基因可

以正常表达，其上下游序列需具备___________________。

(3)转化后，T-DNA(其内部基因在减数分裂时不发生交换)可在基因组单一位

点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的

前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株(如

图)，用于后续验证突变基因与表型的关系。

①农杆菌转化T代植株并自交，将T代种子播种在选择培养基上，能够萌

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发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入了________________________。

②T代阳性植株自交所得的T代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择

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好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。——《中庸》

阳性率约____________%的培养基中幼苗继续培养。

③将②中选出的T代阳性植株________________(填“自交”“与野生型杂

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交”或“与突变体杂交”)所