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液相色谱基础知识演讲人：日期：

目录液相色谱概述液相色谱技术分类固定相与流动相选择实验操作与注意事项液相色谱在科研与工业中应用液相色谱技术发展趋势

01液相色谱概述

定义液相色谱是一类分离与分析技术，以液体作为流动相，固定相有多种形式，如纸、薄板和填充床等。基本原理液相色谱基于样品中不同组分在固定相和流动相之间的分配差异进行分离，通过洗脱和再分配过程实现样品的净化、分离和测定。定义与基本原理

现状高效液相色谱已成为液相色谱的主流，具有高压、高速、高效、高灵敏度等优点，广泛应用于各个领域。早期发展1903年俄国植物化学家茨维特首次提出“色谱法”和“色谱图”的概念，为液相色谱的发展奠定了基础。技术演变液相色谱经历了从纸色谱、薄层色谱到柱液相色谱的发展过程，固定相的形式逐渐多样化，分离效率和分析速度不断提高。发展历程及现状

液相色谱在化学、生物、医药、环境等领域有着广泛的应用，如药物分析、食品安全检测、环境污染物监测等。应用领域随着科技的不断进步和液相色谱技术的不断创新，液相色谱将在更广泛的领域发挥重要作用，为人类的科学研究和生产生活提供更多便利和支持。前景展望应用领域与前景

02液相色谱技术分类

分离原理基于分子大小的差异，大分子不能进入凝胶颗粒内部，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快，路径较短；小分子除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶颗粒内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子的下移速度落后于大分子，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象又称为分子筛现象。凝胶色谱法

分离特点分离效率高，操作简便，对高分子物质有很好的分离效果。应用范围主要用于高聚物、生物大分子等高分子化合物的分离分析。凝胶色谱法

离子色谱法分离原理利用离子交换原理，通过流动相与固定相之间的离子交换来分离离子。分离特点高效、快速、灵敏，能同时分离多种离子化合物。应用范围广泛应用于环境监测、食品分析、工业检测等领域。离子色谱仪离子色谱仪主要由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统以及数据处理系统等组成。

基于生物大分子与固定相表面的特异性亲和作用进行分离。选择性强，分辨率高，对生物大分子的分离和纯化具有独特优势。主要用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。亲和色谱柱是亲和色谱法的核心，由载体和配基组成，配基与待分离的生物大分子具有特异性结合能力。亲和色谱法分离原理分离特点应用范围亲和色谱柱

分离原理基于溶质在固定相和流动相之间的分配系数不同进行分离。分离特点稳定性好，柱寿命长，适用范围广。应用范围广泛适用于各种有机化合物和无机化合物的分离分析。键合相色谱柱将固定相共价结合在载体颗粒上，克服了分配色谱中固定相流失的缺点。键合相色谱法

分配色谱法分离原理基于试样中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同进行分离。分离特点分离效率高，操作简便，但柱寿命较短。应用范围适用于中等极性到弱极性的有机化合物分离分析。分配色谱柱以硅胶、氧化铝等为固定相，以有机溶剂为流动相。

对极性组分具有很强的分离能力，但柱容量较低。分离特点适用于极性有机化合物、有机酸、糖类等物质的分离分析。应用范于溶质在固定相上的吸附能力不同进行分离。分离原理以氧化铝、硅胶等为吸附剂，以极性溶剂为流动相。吸附色谱柱吸附色谱法

03固定相与流动相选择

硅胶极性强，适用于极性化合物的分离；具有一定的孔径和比表面积，能提供良好的分离效果。具有很强的吸附能力，适用于分离极性较弱或非极性的化合物；分离效果与活性炭的孔径和比表面积有关。具有强极性，适用于极性化合物和酸性化合物的分离；耐高温，可用于高温下的色谱分离。通过化学键将有机基团固定在载体表面，适用于各种极性和非极性化合物的分离；稳定性好，柱寿命长。固定相类型及其特点氧化铝活性炭键合固定相

流动相种类与性质如甲醇、乙醇等，适用于极性化合物的分离；能与硅胶等极性固定相产生较强的相互作用。极性流动相如正己烷、环己烷等，适用于非极性化合物的分离；与氧化铝等非极性固定相有较好的互溶性。用于分离离子型化合物，通过与离子型化合物形成离子对而增加其在流动相中的溶解度。非极性流动相用于调节流动相的pH值，使其适应分离酸性或碱性化合物的需求；同时也可起到抑制固定相表面电荷的作用。缓冲子对试剂

极性匹配原则根据样品的极性选择固定相和流动相，保证样品在固定相上有适当的保留并在流动相中能够良好地溶解。惰性匹配原则流动相与固定相之间应具有良好的化学惰性，避免发生化学反应导致固定相失效或样品分解。分离效率原则在满足以上原则的前提下，选择能够实现最佳分离效果的固定相和流动相组合，提高色谱分析的准确性和灵敏度